基于Semkiki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体的构建
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摘要 目的：以semliki森林病毒复制子为基础，构建一类可迅速高效表达shRNA的新型RNAi载体。方法：以Semliki森林病毒衍生的复制子载体pSFV1为骨架，用CMVIE启动子替换SP6启动子并在3'-UTR下游插入SV40 polyA转录终止子，在原26S亚基因组启动子后插入带有相应改良多克隆位点的shRNA表达元件，同时加入抗新霉素选择复合体，并去掉3'-UTR的重复序列。所获载体用于沉默EGFP基因，通过体外细胞转染、病毒颗粒制备、荧光显微镜观察、RT-PCR分析等初步验证、评估其效果。结果：构建了基于Semliki森林病毒复制子的新型RNAi质粒载体psFV-RNAiReady。经体外实验初步证实，该载体直接转染细胞，或与辅助载体共转染，制备成具有感染能力的重组病毒颗粒后使用，均可高水平表达shRNA，沉默目的基因。其中使用病毒颗粒抑抑效率可高迭90%以上。结论：该载体的成功构建，可望显著拓宽SFV载体的应用范围，丰富RNAi实施手段，并用于相关科学研究及基因药物技术开发。
关键词：Semliki森林病毒；RNA干扰；复制子；病毒载体
中图分类号：Q78 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)11-2005-05
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