变性高效液相色谱法筛检hMLH1和hMSH2微小突变技术
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张渊智 盛剑秋 陈彪 张宏 李世荣 郑州市第一人民医院消化科;北京军区总医院消化科;首都医科大学附属宣武医院老年病研究所;解放军153医院急诊科;
【摘要】目的:建立基于变性高效液相色谱法(DHPLC)的快速筛检错配修复基因hMLH1和hMSH2微小突变的技术平台。方法:自行设计PCR扩增hMLH1和hMSH2各外显子的引物,应用DHPLC检测26个遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系的先证者hMLH1和hMSH2种系微小突变,并与先前进行的DNA直接测序结果相比较。结果:hMLH1与hMSH2各外显子的PCR扩增引物,均能很好地扩增出相应的外显子及剪接区;DHPLC检出了所有已知突变,突变阳性筛检与阴性筛检的灵敏度和特异性均为100%;hMLH1的扩增子12A和hMSH2的扩增子2、3、7、5中相应外显子的剪接区跨越2个温度,而且相差较大(2.2-8.5℃):与DNA直接测序相比较,DHPLC具有快速、高效、低劳动强度、费用低、人为误差小、灵敏度和特异性高等优点。结论:基于DH- PLC的突变筛检平台,能够有效地筛检hMLH1和hMSH2微小突变,并具有较高的费用效率比。
【关键词】 变性高效液相色谱法 错配修复基因 外显子 突变 筛检
【分类号】R735.3
变性高效液相色谱法(denaturing high performanee liquid chromatography，DHPLC)是一种新的高通量筛选DNA序列变异技术，具有自动化、快速、高效、检出DNA片段大小范围广等优点，能够检出单核昔酸置换、缺失和插人，灵敏度和特异性均在96%以上，尽管检出的突变仍需进一步测
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摘要 目的：建立基于变性高效液相色谱法(DHPLC)的快速筛检错配修复基因hMLH1和hMSH22微小突变的技术平台。方法：自行设计PCR扩增hMLH1和hMSH2各外显子的引物，应用DHPLC检测26个遗传性非息肉病性结直肠癌(RNPCC)家系的先证者hMLH1和hMSH2种系微小突变，并与先前进行的DNA直接测序结果相比较。结果：hMLH1和hMSH22各外显子的PCR扩增引物，均能很好地扩增出相应的外显子及剪接区；DHPLC检出了所有已知突变，突变阳性筛检与阴性筛检的灵敏度和特异性均为100%；hMLH1的扩增子12A和hMSH2的扩增子2、3、7、5中相应外显子的剪接区跨越2个温度，而且相差较大(2.2-8.5℃)：与DNA直接测序相比较，DIHPLC具有快速、高效、低劳动强度、费用低、人为误差小、灵敏度和特异性高等优点。结论：基于DH-PLC的突变筛检平台，能够有效地筛检hMLH1和hMSH22微小突变，并具有较高的费用效率比。
关键词：变性高效液相色谱法；错配修复基因；外显子；突变；筛检
中图分类号：R.331，R394.3 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)12-2315-06
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