耐辐射奇球菌基因组DNA表达文库的构建与鉴定
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徐向红 李斌元 马云 廖永强 何淑雅 南华大学生物化学与分子生物学教研室;
【摘要】目的:构建耐辐射奇球菌(Deinococcus radioduransR1)基因组DNA表达文库,为进一步研究耐辐射奇球菌高抗辐射的调控网络奠定基础。方法:提取耐辐射奇球菌基因组DNA,用Sau3AI酶将基因组DNA部分酶切成0.5-5kb大小的片段,用T4DNA连接酶将部分酶切片段与经BamHⅠ和碱性磷酸酶(CIAP)处理的pGADT7载体进行连接后电击转化大肠杆菌DH5α。结果:得到重组子数为2.2×104,扩增后的文库滴度为108cfu/mL。结论:构建了耐辐射奇球菌基因组pGADT7表达文库,为进一步筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。
【关键词】 耐辐射奇球菌 基因组DNA表达文库 酵母双杂交系统
【基金】国家自然科学基金(30770647) 湖南省自然科学基金(06JJ2023)
【分类号】R378.1
前言耐辐射奇球菌(Deinococcus radiodurans,简称DR)是一种对电离辐射、紫外线、强氧化剂和化学诱变剂等均具有超强耐受力的极端微生物[1,2]。它在DNA双链断裂修复上具有超强的能力,是目前研究DNA损伤与修复的模式生物。迄今为止,科学家不仅发现了多种耐辐射的细菌,同时也发
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摘要 目的：构建耐辐射奇球菌(Deinoeoccus radiodurans RI)基因组DNA表达文库，为进一步研究耐辐射奇球菌高抗辐射的调控网络奠定基础。方法：提取耐辐射奇球菌基因组DNA，用Sau3AI酶将基因组DNA部分酶切成0.5～5kb大小的片段，用T4 DNA连接酶将部分酶切片段与经BamH I和碱性磷酸酶(CIAP)处理的pGADT7载体进行连接后电击转化大肠杆菌DH5α。结果：得到重组子数为2.2×104，扩增后的文库滴度为108cfu/mL。结论：构建了耐辐射奇球菌基因组pGADT7表达文库，为进一步筛选与高抗辐射相关基因产物的互作蛋白奠定了基础。
关键词：耐辐射奇球菌；基因组DNA表达文库；酵母双杂交系统
中图分类号：R378.1，Q75 Q78 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)05-818-03
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