一种更有效的肝癌靶向性条件复制型腺病毒的构建及体外抑瘤作用
条件复制型腺病毒载体,甲胎蛋白启动子,甲胎蛋白增强子
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傅强 王慧萍 韦芳 李慧明 陈霞芳 王煜非 黄倩 上海交通大学医学院附属上海市第一人民医院中心实验室;
【摘要】目的:分别构建以甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)300bp启动子和800bp增强子-300bp启动子调控复制的条件复制型腺病毒(CRAd),对两种病毒的条件复制性以及溶瘤作用进行比较,为肝癌靶向性治疗提供更优良的载体。方法:以HepG2基因组DNA为模板,PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPe),构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc,通过检测报告基因EGFP和luciferase的表达鉴定启动子和增强子的活性后,构建穿梭质粒pDC311-AFPp-E1A,pDC311-AFPep-E1A并包装出腺病毒Ad.AFPp-E1A和Ad.AFPep-E1A。利用Western blot、病毒增殖、细胞病变、细胞活力等鉴定并比较两种病毒的复制能力和溶瘤作用。结果:Ad.AFPp-E1A和Ad.AFPep-E1A均可在AFP阳性细胞中选择性复制并且具有一定的溶瘤作用,以后者的选择复制性和溶瘤性更为明显。感染病毒Ad.AFPp-E1A后的HepG2、Hep3B细胞的存活率分别为(54.23±7.13)%、(61.18±12.63)%;感染病毒Ad.AFPep-E1A后的HepG2、Hep3B细胞存活率分别为(26.65±5.43)%、(24.49±3.31)%。结论:被截短的800bp增强子片断,在对AFP启动子起到增强作用的同时,可以为腺病毒包装进更多的治疗基因提供空间,从而为肝癌靶向治疗提供更为良好的条件复制型病毒载体。
【关键词】 条件复制型腺病毒载体 甲胎蛋白启动子 甲胎蛋白增强子
【基金】国家重点基础研究计划(No.2004CB518804) 国家自然科学基金杰出青年项目(No.30325043)
【分类号】R735.7
前言我国肝癌的发病率和死亡率很高,传统的放化疗,外科手术效果均不理想,近年兴起的基因治疗已经被认为是最有前景的肿瘤研究方向[1]。而基因治疗的关键就是其靶向性,本研究以甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)启动子和AFP增强子-启动子为基础构建调控腺病毒复制早期基因E1A的
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摘要 目的：分别构建以甲胎蛋白(alpha fetopmtein，AFP)300bp启动子和800bp增强子，300bp启动子调控复制的条件复制型腺病毒(cRAd)，对两种病毒的条件复制性以及溶瘤作用进行比较，为肝癌靶向性治疗提供更优良的载体。方法：以HepG2基因组DNA为模板，PCR扩增AFP基因启动子(AFPp)和增强子(AFPp)，构建表达质粒pAFPp-EGFPluc和pAFPep-EGFPluc，通过检测报告基因EGFP和luciferase的表达鉴定启动子和增强子的活性后，构建穿梭质粒pDc311-p-E1A，pDc311-AFPep-E1A并包装出腺病毒Ad-AFPp-E1A和Ad·AFPep-E1A。利用westemblot、病毒增殖、细胞病变、细胞活力等鉴定并比较两种病毒的复制能力和溶瘤作用。结果：Ad·AFPp。E1A和Ad，AFP印一E1A均可在AFP阳性细胞中选择性复制并且具有一定的溶瘤作用，以后者的选择复制性和溶瘤性更为明显。感染病毒Ad.AFPp-E1A后的H印G2、Hep3B细胞的存活率分别为(54.23±7.13)%、(61.18±12.63)%；感染病毒Ad.AFPep-E1A后的HepG2、Hep3B细胞存活率分别为(26.65±5.43)%、(24.49±3.31)%。结论：被截短的800bp增强子片断，在对AFP启动子起到增强作用的同时，可以为腺病毒包装进更多的治疗基因提供空间，从而为肝癌靶向治疗提供更为良好的条件复制型病毒载体。
关键词：条件复制型腺病毒载体，甲胎蛋白启动子，甲胎蛋白增强子
中图分类号：R332，R322.61 文献标识码：A 文章编号：673-6273(2009)10-1801-04
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