mNUDC基因在巴斯德毕赤酵母中表达载体的构建及表达
分泌表达,酵母表达载体,基因组,生物活性,重组表达载体,重组质粒,正常小鼠,巨核细胞
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陈彦球 魏明旭 张磊 杨燕 中山大学第一附属医院;中山大学教育部基因工程重点实验室;中山大学公共卫生学院;
【摘要】目的:探索小鼠核迁移蛋白C(mNUDC)在毕赤酵母分泌表达的方法。方法:应用PCR扩增本实验室所构建的重组质粒PET28b-his-mNUDC中的mNUDC基因,使用基因重组方法构建毕赤酵母真核表达载体pPICZαA-his-mNUDC,电击转化酵母菌株KM71后,经摇瓶发酵和甲醇诱导,SDS-PAGE和Westernblot分析鉴定上清中重组mNUDC蛋白表达量。结果:经过PCR方法,有效扩增了mNUDC基因,构建了pPICZαA-his-mNUDC酵母表达质粒,序列分析表明所构建的含mNUDC基因的质粒与设计相同,mNUDC蛋白得到正确表达。使用SDS-PAGE和Western blot方法可以检测到mNUDC的稳定、高效地分泌表达。结论:成功地构建了mNUDC基因的毕赤酵母表达载体pPICZαA-his-mNUDC,并在毕赤酵母中实现分泌型离表达,为进一步研究mNUDC蛋白对小鼠的生物活性奠定了实验基础。
【关键词】 mNUDC 毕赤酵母 分泌表达 酵母表达载体 基因组 生物活性 重组表达载体 重组质粒 正常小鼠 巨核细胞
【基金】广东省自然科学基金博士启动资助项目(06300645) 教育部博士点基金新教师资助项目(20070558275) 中山大学2007实验室开放基金项目(KF200707)
【分类号】Q78
前言血小板生成素(thrombopoietin,TPO)在体外具有调节巨核细胞增殖、成熟和血小板形成的功能[1]。但研究发现TPO基因敲除小鼠的血小板计数虽然比正常小鼠降低了85%,但这些小鼠并没有发生出血现象,仍具有形态正常的巨核细胞和血小板[2]。因此推测,很可能存在有其它因子,与TPO
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摘要 目的：探索小鼠核迁移蛋白c(mNUDc)在毕赤酵母分泌表达的方法。方法：应用PCR扩增本实验室所构建的重组质粒PET28b-his-mNuDc中的mNUDC基因，使用基因重组方法构建毕赤酵母真核表达载体pPIcα A-his-mNUDC，电击转化酵母菌株KM71后，经摇瓶发酵和甲醇诱导，SDS-PAGE和westeinblot分析鉴定上清中重组mNuDc蛋白表达量，结果：经过PCR方法，有效扩增了mNuDc基因，构建了pPIczaA-his-mNUDc酵母表达质粒，序列分析表明所构建的含mNuDc基因的质粒与设计相同，mNuDc蛋白得到正确表达、使用SDS-PAGE和wcstem blot方法可以检测到mNuDc的稳定、高效地分泌表达。结论：成功地构建了mNuDc基因的毕赤酵母表达载体pPICZa A-his-mNuDc，并在毕赤酵母中实现分泌型离表达，为进一步研究mNUDC蛋白对小鼠的生物活性奠定了实验基础。
关键词：mNuDc；毕赤酵母；分泌表达
中图分类号：R392.12文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)10-1805-04
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