富含半胱氨酸蛋白61多克隆抗体的制备及其在子痫前期胎盘检测中的作用
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苏莉 刁振宇 胡娅莉 张艳青 王志群 南京医科大学鼓楼临床医学院;扬中市人民医院;南京大学医学院附属鼓楼医院;
【摘要】目的:制备兔抗人富含半胱氨酸蛋白(Cyr61)多克隆抗体,并用该抗体检测Cyr61蛋白在重度子痫前期(PE)和正常妊娠胎盘中的差异表达。方法:用RT-PCR法从Hela细胞中克隆Cyr61全长mRNA,并在大肠杆菌中表达获得重组蛋白,免疫新西兰白兔得到兔抗人Cyr61多克隆抗体。然后用此抗体对14例重度子痫前期胎盘进行检测,并与孕周匹配的14例正常胎盘比较。结果:Cyr61DNA测序结果与参考序列一致;Western blot竞争法证实制备的兔抗Cyr61抗体与商品化的羊抗Cyr61抗体有共同的靶点;用制备的兔抗人Cyr61蛋白抗体Westernblot检测发现,在重度PE胎盘中Cyr61蛋白含量较正常胎盘含量降低(14.2±1.0vs.29.2±1.1P0.05)。结论:本研究成功地在大肠杆菌中表达出Cyr61融合蛋白,并制备了特异性高的兔抗人Cyr61抗体。重度PE胎盘中Cyr61蛋白表达水平降低。
【关键词】 Cyr克隆 重组蛋白 多克隆抗体 子痫前期
【基金】国家自然科学基金(30872775) 江苏省医学重点学科——母胎医学中心(XK200709)基金赞助
【分类号】Q789
前言富含半胱氨酸蛋白(Cyr61)参与多种因素诱发的起始基因反应,具有促进细胞增殖、细胞外基质重构、细胞黏附和促进血管生成等作用[1,2]。研究表明,小鼠剔除Cyr61后,胎盘血管形成减少且难以网络化,这与子痫前期(Preeclampsia,PE)病理生理相似,提示Cyr61可能与PE发病机制有关
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摘要 目的：制备兔抗人富含半胱氨酸蛋白(cyr61)多克隆抗体，并用该抗体检测cyr61蛋白在重度子痫前期(PE)和正常妊娠胎盘中的差异表达。方法：用RT—PcR法从Hela细胞中克隆cyr6l全长mRNA，并在大肠杆菌中表达获得重组蛋白，免疫新西兰白免得到兔抗人cyr6l多克隆抗体。然后用此抗体对14例重度子痫前期胎盘进行检测，并与孕周匹配的14例正常胎盘比较。结果：cvr61DNA测序结果与参考序列一致；westem blot竞争法证实制备的兔抗cyr61抗体与商品化的羊抗cyr61抗体有共同的靶点：用制备的兔抗人cyr61蛋白抗体westemblot检测发现，在重度PE胎盘中cyr61蛋白含量较正常胎盘含量降低(14.2±1.0vs.29.2±1.1 P<0.05)。结论：本研究成功地在大肠杆菌中表达出cyr61融合蛋白，并制备了特异性高的兔抗人cyr61抗体。重度PE胎盘中cyr6l蛋白表达水平降低。
关键词：cyr61 克隆；重组蛋白；多克隆抗体；子痫前期
中图分类号：Q75，R714.245 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)10-1816-04
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