PPARγ基因真核表达载体的构建及其在乳腺癌MDA-MB-231细胞中的表达
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董昕 钟警 周灵芝 吴洁 姜浩 南华大学第一附属医院临床医学研究所;
【摘要】目的:构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-C1-PPARγ,观察小鼠PPARγ基因在MDA-MB-231细胞中的表达及定位。方法:采用克隆和亚克隆技术构建小鼠PPARγ基因真核表达载体,脂质体Lip2000介导转染MDA-MB-231细胞,real-time PCR和western-blot验证其mRNA和蛋白的表达,荧光显微镜观察该基因亚细胞定位。结果:酶切和测序结果证实重组质粒含有PPARγ编码区序列且插入方向正确,转染后观察该基因亚细胞定位于胞核,胞质有弥散分布。结论:成功构建了小鼠PPARγ基因真核表达载体,该基因在MDA-MB-231细胞中成功表达,PPARγ基因主要集中表达于胞核。
【关键词】 PPARγ基因 真核表达载体 转染 亚细胞定位
【基金】湖南省医药卫生科研计划课题资助项目(B2006-108)
【分类号】R737.9
过氧化物酶体增殖物活化受体γ(peroxisome prolifera-tors-activated receptor-gamma,PPARγ)是核激素受体超家族中的一员,是一种配体依赖性的核转录因子[1]。目前,已发现PPARs有3种亚型,即PPARα、PPARβ和PPARγ。这3种亚型在结构及功能上均有差异[2-4]。PPAR具有两种配体
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摘要 目的：构建以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组表达质粒pEGFP-C1-PPARγ，观察小鼠PPARγ基因在MDA-MB-231细胞中的表达及定位。方法：采用克隆和亚克隆技术构建小鼠PPARγ基因真核表达载体，脂质体Lip2000介导转染MDA-MB-231细胞，real-time PcR和westem-blot验证其mRNA和蛋白的表达，荧光显微镜观察该基因亚细胞定位。结果：酶切和测序结果证实重组质粒含有PPARγ编码区序列且插入方向正确，转染后观察该基因亚细胞定位于胞核，胞质有弥散分布。结论：成功构建了小鼠PPARγ基因真核表达载体，该基因在MDA-MB-231细胞中成功表达，PPARγ基因主要集中表达于胞核。
关键词：PPARγ基因；真核表达载体；转染；亚细胞定位
中图分类号：R736.1 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)10-1824.04
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