p21 RNAi的pSUPER载体的构建及功能鉴定
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贾玉红 马天舒 姜妙娜 李淑艳 贾弘禔 大连医科大学病理生理学教研室;大连市中医研究所;北京大学医学部生物化学与分子生物学系;
【摘要】目的:构建抑制p21基因表达的pSUPER RNAi载体(pSUPER-p21)并鉴定其功能。方法:化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向大鼠p21基因的寡核苷酸链,各60个碱基,退火,克隆到经BglⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER质粒上,构建重组RNAi质粒(pSUPER-p21)。通过双酶切鉴定及测序分析验证构建效果。将正确构建的质粒转染大鼠原代培养皮质神经元,western blotting检测经红藻氨酸处理的神经元中p21蛋白表达。结果:pSUPER-p21载体经双酶切鉴定及测序分析,结果表明60个碱基成功插入到预计位点,并且序列完全一致。Western blotting结果证实pSUPER-p21载体可特异性抑制红藻氨酸诱导的原代培养皮质神经元中p21蛋白表达的上调。结论:靶向p21的pSUPER RNAi载体构建成功,该载体可特异性抑制p21基因表达。
【关键词】 p pSUPER RNAi 神经元 载体
【分类号】Q784
前言p21作为一种细胞周期素依赖蛋白激酶(cyclin dependentkinase,CDK)的抑制剂,早期研究认为主要通过抑制CDK来控制细胞周期的进程,影响细胞增殖和引起生长阻滞。近年来在增殖细胞中的研究发现,p21除了控制细胞周期外,也参与DNA损伤修复和细胞凋亡[1]。高度分化的有丝分裂后
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摘要目的：构建抑制p21基因表达的pSUPERRNAi载体(pSUPER-p21)并鉴定其功能。方法：化学合成一对编码短发夹RNA序列的、靶向大鼠p21基因的寡核苷酸链，各60个碱基，退火，克隆到经BgⅡ、HindⅢ双酶切的pSUPER质粒上，构建重组RNAi质粒(pSUPER-p21)。通过双酶切鉴定及测序分析验证构建效果。将正确构建的质粒转染大鼠原代培养皮质神经元，western blotting检测经红藻氨酸处理的神经元中p21蛋白表达。结果：psUPER-p21载体经双酶切鉴定及测序分析，结果表明60个碱基成功插入到预计位点，并且序列完全一致。Westem blotting结果证实pSUPER-p21载体可特异性抑制红藻氨酸诱导的原代培养皮质神经元中p21蛋白表达的上调。结论：靶向p21的pSUPERRNAi载体构建成功，该载体可特异性抑制p21基因表达。
关键词：p21；pSUPER；RNAi；神经元；载体
中图分类号：Q784 文献标志码：A 文章编号：1673-6273(2009)12-2243-03
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