小鼠mP24基因的原核表达及多抗制备
mp,多克隆抗体,WesternBlot,ELISA
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杨宗义 田艳艳 李钰 韩放 哈尔滨工业大学生命科学与工程系;
【摘要】目的:本研究是为后续实验中深入研究小鼠mP24基因的功能及活性提供mP24多克隆抗体。方法:mP24是小鼠中新发现的新基因,通过构建了pET-28a(+)/mP24原核表达质粒,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导宿主细菌表达融合蛋白。经过SDS-PAGE分析,结果表明该蛋白能以可溶性蛋白形式存在。利用镍柱纯化融合蛋白,免疫新西兰兔,制备mP24多抗。结果:Western Blot结果显示,制备的抗小鼠mP24多克隆抗体具有较高的特异性。ELISA实验检测,该多抗对免疫抗原的效价高达1:9000,具有较高的效价。结论:本实验成功制备了mP24的多克隆抗体,为进一步开展mP24基因功能的研究奠定了基础。
【关键词】 mp 多克隆抗体 原核表达 WesternBlot ELISA
【基金】哈尔滨工业大学校创新项目(GFQQ18400017,2008年)
【分类号】R392.11
前言mP24是本课题组在前期研究中发现的人源p23的鼠同源基因,通过检索Gene Bank数据库发现,mP24基因cDNA全长2837 bp,编码217个氨基酸,序列以家鼠内耳组织为材料得来。生物信息学分析表明:mP24分子量为24441.6(24.4 kDa)(故命名为mP24);等电点为4.86。mP24是一个结构和功能未
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摘要目的：本研究是为后续实验中深入研究小鼠mP24基因的功能及活性提供mP24多克隆抗体。方法：mP24是小鼠中新发现的新基因，通过构建了pET-28a(+)/mP24原核表达质粒，转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，IPTG诱导宿主细菌表达融合蛋白。经过SDS-PAGE分析，结果表明该蛋白能以可溶性蛋白形式存在。利用镍柱纯化融合蛋白，免疫新西兰兔，制备mP24多抗。结果：WestemBlot结果显示，制备的抗小鼠mP24多克隆抗体具有较高的特异性。ELISA实验检测，该多抗对免疫抗原的效价高达1:9000，具有较高的效价。结论：本实验成功制备了mP24的多克隆抗体，为进一步开展mP24基因功能的研究奠定了基础。
关键词：mp24；多克隆抗体；原核表达；westemBlot；ELISA
中图分类号：R392.11，Q75，Q78，Q95-3 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)13-2428-04
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