小干扰RNA靶向EGFR基因逆转卵巢癌细胞顺铂耐药的研究
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戚玉言 陈爱平 张红玲 张春梅 牛兆园 青岛大学医学院;青岛大学医学院附属医院妇科;
【摘要】目的:探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株EGFR基因的表达并逆转其顺铂耐药的可行性。方法:体外构建EGFR小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒,脂质体法介导将其转染入SKOV3/DDP细胞。实验分为正常对照组、空质粒转染组、非特异性转染组和特异性转染组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EGFR mRNA的表达;使用免疫细胞化学法(ICC)检测EGFR蛋白的表达;使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)。结果:EGFR shRNA转染组细胞EGFR mRNA的表达与其他两组相比明显减弱(P0.01),EGFR蛋白表达明显下调(P0.01);顺铂敏感性比正常对照组提高了约2.5倍。结论:针对EGFR合成的siRNA能够有效地抑制EGFR mRNA和蛋白的表达,并能恢复其对顺铂的敏感性。应用RNAi技术,能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性。
【关键词】 卵巢肿瘤 基因 EGFR RNA干扰 顺铂
【分类号】R737.31
前言卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,其5年生存率仅为20%~30%。治疗的难点为卵巢癌细胞对化疗药物,尤其是一线化疗药物顺铂产生耐药性,严重阻断了化疗药物的抗肿瘤效应。如何有效地逆转化疗耐药成为肿瘤治疗的热点。EGFR是表皮生长因子受体家族成员之一,是原癌基因C-erbB-1的表
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摘要目的：探讨载体表达的小干扰RNA(siRNA)影响卵巢癌耐药细胞株EGFR基因的表达并逆转其顺铂耐药的可行性。方法：体外构建EGFR小发卡状RNA(shRNA)的表达质粒，脂质体法介导将其转染入SKOV3/DDP细胞。实验分为正常对照组、空质粒转染组、非特异性转染组和特异性转染组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测EGFR mRNA的表达；使用免疫细胞化学法(ICC)检测EGFR蛋白的表达；使用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)测定各组细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)。结果：EGFR shRNA转染组细胞EGFR mRNA的表达与其他两组相比明显减弱(P<0.01)，EGFR蛋白表达明显下调(P<0.01)；顺铂敏感性比正常对照组提高了约2.5倍。结论：针对EOFR合成的siRNA能够有效地抑制EGFR mRNA和蛋白的表达，并能恢复其对顺铂的敏感性。应用RNAi技术，能够逆转卵巢癌细胞对化疗药物的耐药性。
关键词：卵巢肿瘤；基因；EGFR；RNA干扰；顺铂
中图分类号：R737.31 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)13-2443-04
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