人促红细胞生成素基因和GFP共表达的输卵管特异性表达载体的构建
 |
| 第1页 |
参见附件(476KB，5页)。
喻小亮 胡雄贵 谢达平 P.Trefil 邓缘 燕海峰 湖南农业大学生物科学技术学院;湖南省畜牧兽医研究所;捷克生物医药研究所;
【摘要】本实验从蛋鸡输卵管基因组DNA中扩增出约1.3kb的卵清蛋白5'端调控区(OV),并从质粒扩增出人促红细胞生成素(hEPO)基因组DNA。将hEPO亚克隆入pEGFP-C1载体的多克隆位点,命名为pEGFP-hEPO,然后将OV片段亚克隆入经Ase I和Vsp I双酶切的切口处,替换掉CMV启动子,经测序和酶切鉴定正确,成功构建了鸡卵清蛋白5'端调控区调控人促红细胞生成素的共表达载体pOV-GFP-hEPO。并利用脂质体转染法转染鸡输卵管上皮细胞,用荧光倒置显微镜观测绿色荧光蛋白的表达,结果显示共表达载体pOV-GFP-hEPO能够在鸡输卵管上皮细胞定位表达。为制备生产人促红细胞生成素的鸡输卵管生物反应器奠定了基础。
【关键词】 卵清蛋白 促红细胞生成素 共表达 生物反应器
【基金】科技部中捷政府间科技合作项目(中方37-10) 湖南省科技攻关项目(06WK3001) 长沙市留学人员创业资助基金(k068017)
【分类号】Q78
引言鸡输卵管生物反应器目前已成为继哺乳动物乳腺生物反应器后最具开发前景的动物生物反应器,一旦有突破性进展,制作转基因鸡和利用它们作为生物反应器,将可获得大量有价值而廉价的蛋白。人促红细胞生成素(human erythropoietin,hEPO)是一种由肾脏分泌的酸性糖蛋白激素。它
------
摘要：本实验从蛋鸡输卵管基因组DNA中扩增出约1.3kb的卵清蛋白5'端调控区(OV)，并从质粒扩增出人促红细胞生成素(hEPO)基因组DNA。将hEPO亚克隆入pEGFP-C1载体的多克隆位点，命名为pEGFP-hEPO，然后将OV片段亚克隆入经Ase I和Vsp I双酶切的切口处，替换掉CMV启动子，经测序和酶切鉴定正确，成功构建了鸡卵清蛋白5'端调控区调控人促红细胞生成素的共表达载体pOV-GFP-hEPO。并利用脂质体转染法转染鸡输卵管上皮细胞，用荧光倒置显微镜观测绿色荧光蛋白的表达，结果显示共表达载体pOV-GFP-hEPO能够在鸡输卵管上皮细胞定位表达。为制备生产人促红细胞生成素的鸡输卵管生物反应器奠定了基础。
关键词：卵清蛋白；促红细胞生成素；共表达；生物反应器
中图分类号：R394.1，R75 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)13-2460-05
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(476KB，5页)。