抑制VEGF基因表达对乳腺癌细胞细胞周期的影响
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张金玉 葛银林 张晓 侯琳 薛美兰 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室;
【摘要】目的:研究针对VEGF基因的siRNA(small interference RNA)对乳腺癌MCF-7细胞细胞周期的影响。方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对VEGF基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA。脂质体转染法将合成的siRNA转染入MCF-7细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNAscr转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期变化,RT-PCR法比较转染前后p21、CyclinD1表达水平的变化,Westernblot检测转染前后磷酸化ERK的表达。结果:细胞计数法结果显示,转染24h后siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48h后,抑制效率稳定。siRNA转染后能有效地抑制MCF-7细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,S期细胞明显减少,G0/G1期细胞比例逐渐增多;p21mRNA表达显著上调,抑制Cyclin D1 mRNA及磷酸化ERK蛋白的表达。结论:体外转录合成的siRNA可能通过上调细胞周期蛋白激酶抑制剂p21的表达,下调Cyclin D1及磷酸化ERK的表达,将细胞周期阻滞于G0/G1期,从而显著抑制MCF-7细胞的增殖。
【关键词】 小干扰RNA VEGF 细胞周期 MCF-细胞
【基金】青岛大学青年科研基金资助项目
【分类号】R737.9
前言乳腺癌是全球妇女最常见的恶性肿瘤,在欧美的发达国家,乳腺癌发病率均在60/10万以上,占女性恶性肿瘤首位。近20年在我国的发病率逐渐升高,严重威胁女性的身体健康。随着分子肿瘤学研究的不断深入,提出肿瘤细胞一个特征性表型异常是细胞周期调控失常,其也成为抑制肿瘤生长
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摘要 目的：研究针对VEGF基因的siRNA(small interference RNA)对乳腺癌McF-7细胞细胞周期的影响。方法：依据Promega公司在网上提供的设计软件，设计针对VEGF基因的siRNA，合成DNA模板，体外转录合成siRNA。脂质体转染法将合成的siRNA转染入MCF-7细胞，以未转染细胞以及错义序列siRNAscr转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA对MCF-7细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期变化，RT-PCR，法比较转染前后p21、cyclinDl表达水平的变化，Westemblot检测转染前后磷酸化ERK的表达。结果：细胞计数法结果显示，转染24 h后siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖，转染48h后，抑制效率稳定。siRNA转染后能有效地抑制MCF-7细胞的增殖，阻滞细胞周期于G0/G1期，S期细胞明显减少，G0/G1期细胞比例逐渐增多；p21mRNA表达显著上调，抑制Cyclin D1 mRNA及磷酸化ERK蛋白的表达。结论：体外转录合成的siRNA可能通过上调细胞周期蛋白激酶抑制剂p21的表达，下调Cyclin D1及磷酸化ERK的表达，将细胞周期阻滞于G0/G1期，从而显著抑制MCF-7细胞的增殖。
关键词：小干扰RNA；VEGF；细胞周期；MCF-7细胞
中图分类号：Q753；R737.9文献标识码：A 文章编号：1673—6273(2009)15—2834—04
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