人色素域解旋酶DNA结合蛋白5的基因克隆及其真核表达载体的构建
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经纬 王国坤 陈程 曲乐 胡先贵 第二军医大学第一附属医院普外科;第二军医大学第一附属医院心血管内科;第二军医大学;
【摘要】目的:克隆人色素域解旋酶DNA结合蛋白5(chromodomain helicase DNA-binding protein5,CHD5)基因并构建真核表达载体。方法:应用PCR扩增人CHD5基因的编码区,使用基因重组方法构建真核细胞表达载体peGFPc1-CHD5,实时定量PCR技术检测重组质粒peGFPc1-CHD5转染293T工具细胞后的过表达能力。结果:经过PCR方法,有效扩增了CHD5基因编码区,构建了peGFPc1-CHD5真核细胞表达质粒,测序分析表明所克隆的CHD5基因编码区序列无误。实时定量PCR检测结果表明重组质粒peGFPc1-CHD5能有效地过表达CHD5基因。结论:成功地构建了人CHD5的真核细胞表达载体peGFPc1-CHD5,并在293T工具细胞中实现过表达,为进一步研究奠定了实验基础。
【关键词】 人色素域解旋酶DNA结合蛋白 基因克隆 重组质粒
【基金】第二军医大学青年启动基金
【分类号】Q78
前言1977年Brodeur在对神经胶质瘤病人进行研究时发现病人在1号染色体短臂3区6带(1p36)存在缺失[1],后续的研究发现其它癌症中亦存在此现象[2-4],Bagchi等[5]证实此处缺失的是人色素域解旋酶DNA结合蛋白5(chromodomain helicaseDNA-binding protein5,CHD5),其功能主要是作为
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前言
1977年Brodcur在对神经胶质瘤病人进行研究时发现病人在1号染色体短臂3区6带(lp36)存在缺失，后续的研究发现其它癌症中亦存在此现象，Bagchi等钲实此处缺失的是人色素域解旋酶DNA结合蛋白5(Chrom。domain helicase DNA—bindingprotein5，CHD5)，其功能主要是作为抑癌基因抑制肿瘤生长。CHD5通过p19ARF/p53信号通路调控细胞增殖，衰老和凋亡，可能是整个抑癌体系的上游基因15J，但详细机制尚欠明确。因此，构建其相关载体并进行功能研究具有重要的意义。本研究利用真核表达体系制备重组人CHD5蛋白，旨在为系统研究CHD5的抗肿瘤作用机制奠定基础。
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