人黑色素瘤相关抗原Restin的克隆和表达
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王卫华 路凡 沈琦 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;解放军总医院老年消化科;
【摘要】目的:通过对原核表达载体、表达条件和宿主菌的优化,利用原核表达系统有效表达可溶性的人Restin融合蛋白。方法:应用PCR方法扩增获得Restin编码区,克隆入原核表达载体pET44a(+),分别转化E.coli BL21(DE3)和E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3),不同的IPTG浓度诱导表达Restin重组融合蛋白,SDS-PAGE和Western Blot分析表达产物。结果:成功构建了重组载体pET44a(+)-Restin,并在E.coli Rosetta-gamiTM2(DE3)中获得了可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的8.9%。结论:可溶性Restin融合蛋白的获得为后续的功能研究、蛋白制备及其抗体研制奠定了基础。
【关键词】 Restin 原核表达 重组融合蛋白
【基金】国家高技术研究发展计划(863计划)项目(No.2006AA02Z157)
【分类号】Q78
前言Restin又名MAGE H1,是本实验室从全反式维甲酸诱导的HL-60细胞中克隆得到的黑色素瘤相关抗原(melanomaassociated antigen,MAGE)新基因(GenBank确认号为:NM_014061)。该基因定位于人类染色体Xp11.21,全长1475bp,含一个开放读码框,编码219个氨基酸,蛋白质分子量约为24.4kD
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前言
Restin又名MAGE H1，是本实验室从全反式维甲酸诱导的HL-60细胞中克隆得到的黑色素瘤相关抗原(melanomaassociated antigen，MAGE)新基因 (GenBank确认号为：NM_014061)。该基因定位于人类染色体Xp11.21，全长1475bp，含一个开放读码框，编码219个氨基酸，蛋白质分子量约为24.4 kD。等电点为9.05。生物信息学分析显示，Restin与MAGED、Necdin等碱性MAGE蛋白高度同源，含有一个黑色素瘤相关抗原同源结构域(melanoma homologous domain，MHD)，为碱性MAGE成员。
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