猪软骨链蛋白的提取及鉴定
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刘志强 强永刚 廖永华 梁智欣 广州医学院实验核医学教研室;
【摘要】目的:提取和鉴定猪肋骨软骨链蛋白(p-CLP),测定p-CLP与透明质酸的亲和力,为软骨链蛋白在肿瘤显影中提供实验依据。方法:亲和层析法从仔猪肋软骨提取软骨链蛋白(p-CLP),SDS-PAGE凝胶电泳、氨基酸分析法分析p-CLP,放射性体外结合分析测定p-CLP与透明质酸(HA)的亲和力。结果:p-CLP的抽提蛋白得率为2.2%,p-CLP氨基酸分析示谷氨酸含量最高(2.26mg/20mg),放射性体外结合实验示p-CLP与HA的结合活性KA为(6.30±1.73)×109M-1。结论:亲和层析法提取p-CLP得率高,p-CLP与HA有较高的结合力,能够为p-CLP在肿瘤、眼科疾病、骨骼疾病的防治中提供实验依据。
【关键词】 猪软骨链蛋白 纯化 鉴定
【基金】国家自然科学基金(30670622) 广州科技计划项目(2008J1-C261) 广州市教育局项目(61049)
【分类号】R341
前言软骨链蛋白属于透明质酸(HA)粘附素家族中的一种,能够特异性的与HA结合的一种大分子蛋白质;HA广泛分布于结缔组织、皮肤、及软骨中,它是细胞质基质的组成成份之一[1],在调节渗透压、连接细胞、润滑关节、血管生成、伤口愈合等方面发挥重要的生理作用,而这些过程均需要HA与
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软骨链蛋白属于透明质酸(HA)粘附素家族中的一种，能够特异性的与HA结合的一种大分子蛋白质；HA广泛分布于结缔组织、皮肤、及软骨中，它是细胞质基质的组成成份之一，在调节渗透压、连接细胞，润滑关节、血管生成、伤口愈合等方面发挥重要的生理作用，而这些过程均需要HA与CLP的相互作用完成；在病理状态下，特别是肿瘤、眼科病、骨骼疾病患者体内，HA和CLP的含量均高出正常组织，其中HA对肿瘤的作用具体表现在：参与肿瘤细胞的信号传导、促进瘤细胞增值、促进瘤内新血管与肿瘤淋巴管的生成、促进瘤细胞的运动、抑制肿瘤的凋亡。鉴于HA在这些疾病的高表达和CLP与HA的特异性结合，本实验利用亲和层析从仔猪肋软骨提取p-CLP并对其进行鉴定，为p-CLP在肿瘤、眼科病、骨骼病等疾病的防治中提供实验参数。
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