靶向WNT5A基因的shRNA逆转录病毒表达载体的构建与鉴定
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覃丽 朱能 谢志忠 钱朝南 廖端芳 南华大学药物药理研究所;南华大学第二附属医院;华南肿瘤学国家重点实验室;
【摘要】目的:构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体。方法:根据人WNT5A基因mRNA序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸,将退火后形成的双链连接于pSUPER Retro RNAi质粒,构建WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体,经脂质体介导入GPG293细胞,包装成逆转录病毒。用该逆转录病毒感染人鼻咽癌细胞,Western blot法和RT-PCR检测细胞WNT5A的表达。结果:目的序列成功连接于载体并包装成逆转录病毒,免疫印迹检测和RT-PCR检测结果表明构建的WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体能显著抑制鼻咽癌细胞WNT5A的表达。结论:成功构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体。
【关键词】 WNTA RNA干扰 逆转录病毒载体
【基金】国家自然科学基金(30971170) 南华大学院士基金(2008XQD02)
【分类号】Q782
Chinese Library Classification:Q782Document code:AArticle ID:1673-6273(2009)24-4652-04WNTs是一类广泛存在的分泌性糖蛋白,目前已知的主要有19种。这些蛋白在胚胎发育中呈现独特的表达形式和不同的生物功能。根据诱导小鼠上皮细胞C57MG转化能力的高低,WNT家族被划分为
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摘要 目的：构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体。方法：根据人WNT5A基因删A序列设计并合成两条互补的DNA单链寡核苷酸，将退火后形成的双链连接于pSUPER Retro RNAi质粒，构建WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体，经脂质体介导入GPG293细胞，包装成逆转录病毒。用该逆转录病毒感染人鼻咽癌细胞，Westem blot法和RT-PCR检测细胞WNT5A的表达。结果：目的序列成功连接于载体并包装成逆转录病毒，免疫印迹检测和RT-PCR检测结果表明构建的WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体能显著抑制鼻咽癌细胞WNT5A的表达。结论：成功构建人WNT5A shRNA逆转录病毒表达载体。
关键词：WNT5A；RNA干扰；逆转录病毒载体
中图分类号：Q782文献标识码：A文章编号：1673—6273(2009)24—4652—04
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