携带HSV-1TK基因的逆转录病毒载体构建及在HeLa细胞中的表达
单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因,宫颈癌
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张巨峰 樊东升 张超 卢彦欣 王俊伟 牟艳芳 陈艳娜 万峻 深圳北京大学香港科技大学医学中心生物医学研究所;广东药学院生命科学与生物制药学院;内蒙古医学院附属第二医院骨科;
【摘要】目的:构建携带单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase,HSV-TK)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:用限制性内切酶从质粒pcDNA3.1/HA-myc-His(-)Z-TK切下HSV-1TK cDNA序列,亚克隆入逆转录病毒载体pLXSN得到重组质粒pLXSN-TK,鉴定正确的阳性重组质粒经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR和Western blotting方法检测HSV-1TK基因在HeLa中的整合和表达情况。结果:重组质粒pLXSN-TK经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现HSV-1TK基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录和翻译。结论:成功构建了逆转录病毒pLXSN-TK,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的治疗基因HSV-1TK在细胞中表达,为今后HSV-1TK基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。
【关键词】 单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶基因 逆转录病毒 宫颈癌
【基金】教育部中国博士后科学基金(20080440778) 深港创新圈计划(08fz-11)
【分类号】R373
前言自杀基因(Suicide genes)是编码一些存在于病毒或细菌体内酶的基因,所编码的酶能将基本无毒的药物前体(produrg)代谢为有细胞毒性的药物(drug)。单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶/戊环鸟苷系统(HSV-1TK/GCV)是目前研究最多的自杀基因治疗系统之一,在该系统中,本身无毒性的GC
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前言
自杀基因(Suicide genes)是编码一些存在于病毒或细菌体内酶的基因，所编码的酶能将基本无毒的药物前体(produrg)代谢为有细胞毒性的药物(drug)。单纯疱疹病毒脱氧胸腺嘧啶激酶/戊环鸟苷系统(HSV-1TK/GCV)是目前研究最多的自杀基因治疗系统之一，在该系统中，本身无毒性的GCV在HSV-1TK作用下，变成GCV单磷酸盐(GCV-MP)，再经内源性细胞激酶作用，迅速转化为其二磷酸(GCV-DP)和三磷酸盐(GCV-TP)，后者对增殖中的靶细胞具有高度毒性。研究表明，HSV-1TK基因治疗系统具有”旁观者效应”(bystander effect)，即不仅仅使被转染的靶细胞死亡，也可以使周围未转染细胞死亡，能大大增强该系统的杀伤肿瘤效率。目前，这种疗法对多种恶性肿瘤治疗已经用于临床试验，并具有可靠的效果。
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