人肝癌靶向性CD80基因表达重组腺病毒载体的构建及鉴定
 |
| 第1页 |
参见附件(2733KB，4页)。
温银田 张丙芳 叶菁 吴雅岚 王净 李勇 第四军医大学西京医院老年病科;第四军医大学病理与病理生理学教研室;第四军医大学唐都医院耳鼻喉科;
【摘要】目的:构建人肝癌靶向性CD80基因重组腺病毒载体。方法:首先,从人基因组DNA中克隆AFP增强子、启动子,利用腺病毒穿梭质粒pShuttle和pShutte-CMV,采用AFP增强子替换CMV启动子,构建含有AFP启动子和增强子的穿梭质粒,命名为pShuttle-AFP。将人CD80基因克隆到pShuttle-AFP的AFP增强子和启动子之后,构建pShuttle-AFP-CD80质粒。再将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coliBJ5183,利用同源重组构建腺病毒质粒pAd-AFP-CD80。以获得的重组子转染AD293细胞后制备重组腺病毒,并对重组的病毒进行鉴定和病毒滴度测定。结果:测序结果与Genebank中公布的AFP启动子、核心增强子和CD80基因序列相符。双酶切结果与预期结果相符。PacI酶切结果与目的结果一致。穿梭质粒pShutte-AFP-CD80和腺病毒质粒pAd-AFP-CD80经酶切和PCR鉴定均获得期望大小的目的片段。结论:成功的构建了人肝癌靶向性pAd-AFP-CD80腺病毒载体,为CD80基因在肝癌靶向性治疗的研究奠定了基础。
【关键词】 肝癌 靶向治疗 CD 腺病毒
【基金】国家"重大新药创制"科技重大专项(2009ZX09102)
【分类号】Q78
由于基因治疗的高效性和靶向性,使肿瘤的基因治疗成为近年来的研究热点。在肝癌研究中发现,甲胎蛋白(Alpha-FetalProtein,AFP)是一种肝细胞肝癌重要的蛋白质标物,而采用AFP蛋白基因转录顺式作用元件,控制目的基因表达已成为肝细胞肝癌靶向基因治疗的一种重要方法[1]。CD80是
------
摘要 目的：构建人肝癌靶向性CD80基因重组腺病毒载体。方法：首先，从人基因纽DNA中克隆AFP增强子、启动子，利用腺病毒穿梭质粒pShurtle和pShuRe-CMV，采用AFP增强子替换CMV启动子，构建合有AFP启动子和增强子的穿梭质粒，命名为pshurtle-AFP。将人CD80基因克隆到pshutne-AFP的AFP增强子和启动子之后，构建pshuttle-AFP-CD80质粒。再将其与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化E.coli BJ5183，利用同源重组构建腺病毒质粒pAd-AFP-CD80。以获得的重组子转染AD293细胞后制备重组腺病毒，并对重组的病毒进行鉴定和病毒滴度测定。结果：测序结果与Genebank中公布的AFP启动子、核心增强子和CD80基因序列相符。双酶切结果与预期结果相符。Pac I酶切结果与目的结果一致。穿梭质粒pshuge-AFP-CD80和腺病毒质粒pAd-AFP-CD80经酶切和PCR鉴定均获得期望大小的目的片段。结论：成功的构建了人肝癌靶向性pAd-AFP-CD80腺病毒栽体，为CD80基因在肝癌靶向性治疗的研究奠定了基础。
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2733KB，4页)。