FKBP12真核表达载体的构建及稳定转染A549细胞株的建立
FK结合蛋白(FK,Binding,proteins,FKBP)基因
 |
| 第1页 |
参见附件(1965KB，3页)。
汤莹 方琦 史道华 福建医科大学福总临床医学院;南京军区福州总医院药学科;
【摘要】目的:构建FK506结合蛋白12(FK506 binding proteins 12,FKBP12)真核表达载体并建立稳定转染A549细胞株。方法:RT-PCR扩增人平滑肌细胞FKBP12基因片断,构建pcDNA3.1/Hygro(+)-FKBP12真核表达载体,经琼脂糖电泳、特异性内切酶切割及测序验证其正确性。脂质体法转染真核细胞A549,HygromycinB筛选建立稳定转染的细胞株,免疫印迹法检测稳定转染的细胞株。结果:构建了FKBP12真核表达载体并建立了稳定转染的A549细胞株,成功表达FKBP12蛋白。结论:FKBP12真核表达载体成功构建及稳定转染A549细胞株的建立,为深入研究基于FKBP12靶点药物的机制奠定基础,进而为探索安全、高效的免疫抑制剂提供新的途径。
【关键词】 FK结合蛋白(FK Binding proteins FKBP)基因 真核表达载体 稳定转染
【基金】福建省自然科学基金项目(No.2008J0103) 南京军区医学科学技术研究"十一五"计划课题(06MA154)
【分类号】Q782
前言FKBPs属于免疫亲和素(Immunophilin)的一个亚类,现已发现FKBP家族成员20多个[1],FKBP12是免疫抑制剂FK506结合蛋白(FK506-binding protein,FKBP)家族的主要成员。FKBP12是高保守且高丰度的蛋白质[2],能够与免疫抑制剂FK506或雷帕霉素(rapamycin)结合,发挥其免疫抑制的作用
------
前言
FKBPs属于免疫亲和素(Immunophilin)的一个亚类，现已发现FKBP家族成员20多个，FKBP12是免疫抑制剂FK506结合蛋白(FK506-binding protein，FKBP)家族的主要成员。FKBP12是高保守且高丰度的蛋白质，能够与免疫抑制剂FK506或雷帕霉素(rapamycin)结合，发挥其免疫抑制的作用；FK506-FIG3P12复合体作用的靶分子是一种钙/钙调蛋白依赖性蛋白磷酸酶的胞浆蛋白(calcineurin，CN)，使该磷酸酶的活性降低，从而抑制T细胞早期的活化、细胞因子产生和淋巴细胞的活化，减少移植排斥反应发生率，降低排斥反应的强度。为了进-二步研究基于FKBPl2靶点药物的机制以及探索安全、高效的免疫抑制剂，我们克隆了FKBP12，构建其真核表达载体，并建立稳定转染真核细胞株。现报道如下。
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1965KB，3页)。