hTERT基因组成型过量表达的Vero细胞系的建立
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王海涛 叶玲玲 李世崇 刘红 谢靖 吴本传 陈昭烈 军事医学科学院生物工程研究所;
【摘要】目的:建立组成型过量表达hTERT的Vero细胞系。方法:从质粒pCI-neo-hTERT酶切、分离纯化hTERT cDNA,克隆入phEF/chMAR-hyg载体中,构建重组真核表达质粒phEF/chMAR-hyg-hTERT。采用脂质体转染法转染Vero细胞,经潮霉素筛选、克隆分离培养,用RT-PCR检测转染阳性细胞克隆的hTERT mRNA表达丰度,Western blotting验证高丰度表达hTERT mRNA克隆的hTERT表达。用Cedex AS20细胞密度和活力分析系统考察过量表达hTERT Vero细胞在组织培养板中批次培养的生长特性。结果:从phEF/chMAR-hyg-hTERT转染阳性细胞中筛选出hTERT mRNA和蛋白高丰度表达的Vero细胞系(Vero-T1),Vero-T细胞在批次培养中后期的细胞密度和活力均高于野生型Vero细胞。结论:成功建立了hTERT基因组成型过量表达的Vero细胞系,为探索以组成型过量表达hTERT的技术途径改善细胞培养特性、提高病毒疫苗生产工艺水平奠定了基础。
【关键词】 hTERT 过量表达 Vero细胞 细胞系
【基金】"十一五"国家科技支撑计划项目课题(2008BAI66B02) "重大新药创制"国家重大科技专项课题(2009ZX09503-011)
【分类号】Q782
前言Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可使用的人用疫苗生产细胞系[1]。目前,受Vero细胞贴附依赖生长特性的限制,病毒疫苗的生产主要是通过Vero细胞的微载体固定化培养而得于实现[2,3]。微载体的使用既加大了病毒疫苗生产的成本,更加大了病毒疫苗生产、特别是无血
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前言
Vero细胞是世界卫生组织和我国生物制品规程认可使用的人用疫苗生产细胞系。目前，受Vero细胞贴附依赖生长特性的限制，病毒疫苗的生产主要是通过Vero细胞的微载体固定化培养而得于实现。微载体的使用既加大了病毒疫苗生产的成本，更加大了病毒疫苗生产、特别是无血清病毒疫苗生产规模放大的技术难度。另一方面，Vero细胞微载体固定化培养和病毒感染后出现的细胞凋亡，对病毒疫苗的生产效率和产品质量有着明显的影响。
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