重叠延伸PCR法构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体
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周艳春 牛青霞 许燕璇 陈少英 汕头大学医学院炎症与免疫性疾病研究所;
【摘要】目的:构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体。方法:将10ugLPS和等体积的完全福氏佐剂乳化后皮下注射C57BL/6小鼠,7天后,取小鼠脾脏,提取脾细胞总RNA,通过RT-PCR克隆小鼠EBI3和IL-12p35cDNA;采用重叠延伸PCR,通过编码疏水性多肽接头(Gly4Ser)3的DNA序列连接小鼠EBI3全长基因和IL-12p35成熟肽基因,构建小鼠IL-35单链融合基因(mouse sigle chain IL-35,mscIL-35),并将其克隆至pcDNA3.1/V5-His訫TOPO誖TA载体。通过酶切和测序鉴定阳性重组载体。结果:DNA序列分析结果表明:小鼠IL-35单链融合基因中EBI3、IL-12p35和linker的连接顺序、方向及序列完全正确。结论:成功构建了小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达载体,为进一步探讨IL-35的生物学功能奠定了基础。
【关键词】 小鼠白介素 融合基因 重叠延伸PCR
【分类号】Q78
前言IL-35(Interleukin-35)是新近命名的具有抗炎作用的细胞因子,属于IL-12家族[1,2],是调节性T细胞发挥其最大抑制作用的关键分子。天然IL-35为一异源二聚体糖蛋白,由EBI3和IL-12p35两个亚基通过二硫键相连构成。EBI3(Epstein-Barrvirus-induced gene3)主要由髓样细胞系分泌
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摘 要 目的：构建小鼠IL-35单链融合基因及其真核表达栽体。方法：将10ugLPs和等体积的完全福氏佐剂乳化后皮下注射C57BL/6小鼠，7天后，取小鼠脾脏，提取脾细胞总RNA，通过RT-PCR克隆小鼠EBl3和IL-12p35 cDNA；采用重叠延伸PCR，通过编码疏水性多肽接头(Gly4ser)3的DNA序列连接小鼠BBl3全长基因和IL-12p35成熟肽基因，构建小鼠IL-35单链融合基因
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