小鼠Oct4基因真核表达载体的构建及表达鉴定
小鼠胚胎干细胞,Oct基因,pcDNA.(+)载体
 |
| 第1页 |
参见附件(1107KB，2页)。
陈天姬 杜娟 卢光琇 中南大学生殖与干细胞工程研究所;
【摘要】目的:构建小鼠Oct4基因真核表达载体并对其表达进行鉴定。方法:以小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESCs)cDNA为模板克隆Oct4基因编码区序列,将其通过定向克隆插入pcDNA3.1(+)载体多克隆酶切位点(multiple cloning sites,MCS)中,形成pcDNA3.1(+)/Oct4重组载体。将pcDNA3.1(+)空载体和pcDNA3.1(+)/Oct4重组载体分别转染293T细胞,通过Western Blotting检测Oct4蛋白的表达。结果:成功检测到Oct4蛋白的表达。结论:成功构建了小鼠Oct4基因真核表达载体。
【关键词】 小鼠胚胎干细胞 Oct基因 pcDNA.(+)载体
【基金】国家自然科学基金资助项目(30570937) 中南大学研究生创新基金资助项目(2340-74334000003)
【分类号】S865.13;Q78
胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESCs)来源于囊胚期内细胞团(Inner cell mass,ICM)[1],其最显著的特征是具有多向分化潜能和自我更新能力[2]。维持ESCs多向分化潜能和自我更新的分子机制是干细胞相关研究及应用的重要基础,目前已经知道干细胞的多能性和自我更新是由一些内
------
胚胎干细胞(Embryonic stem cells，ESCs)来源于囊胚期内细胞团(Innercell mass，ICM)，其最显著的特征是具有多向分化潜能和自我更新能力。维持ESCs多向分化潜能和自我更新的分子机制是干细胞相关研究及应用的重要基础，目前已经知道干细胞的多能性和自我更新是由一些内源和外源性因子组成的一个复杂的调控网络来共同调节的。其中POU转录因子家族成员Oct4是这个调控网络中最早发现的关键因子之一。它处于该调控网络的最上游，和Nanog，Sox2等因子一起参与维持ESCs的不分化并调控其它干细胞相关基因的表达。我们从小鼠ESCs(mESCs)cDNA中克隆得到Oct4基因的编码框序列，构建了pcDNA3.1(+)/Oct4重组载体，并通过West—em Blotting验证了该载体能成功表达出Oct4蛋白。利用该真核表达载体，我们不仅可以对Oct4的功能进行进一步的深入研究，还可以开展一系列下游工作，如Oct4调控网络相关研究等。本研究为进一步研究mESCs维持不分化的分子机制提供了工作基础。
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1107KB，2页)。