多种血清小分子蛋白分离提纯方法比较研究
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赵莲 曾希 杨静 李征 沈守荣 中南大学湘雅三医院消化科;中南大学湘雅医学院肿瘤研究所;
【摘要】目的:比较不同磁珠及超滤离心管对血清小分子蛋白的分离提纯能力,筛选较优的分离提纯方法。方法:分别利用Cu2+螯合磁珠(MB-IMAC Cu)、弱阳离子磁珠(MB-WCX)、反相C18磁珠(MB-RPC18)及3种不同型号的超滤离心管对同样4例血清标本进行血清小分子蛋白的分离提纯,比较6种方法对血清高丰度大蛋白的去除能力和处理后血清小分子蛋白质谱图的质量。结果:6种不同的方法均有明显对血清高丰度蛋白的去除能力,其中以超滤离心管效果最明显。在血清小分子蛋白质谱图质量上,磁珠处理后血清生成的质谱图质量更好,其中MB-WCX处理后血清质谱图中总峰数量最多,且在各分子量范围均分布均匀,适于后期鉴定。结论:利用MB-WCX对原始血清进行分离提纯能够获得质量较好的血清小分子蛋白质谱图,可以为进一步实验中寻找差异小分子蛋白并实现兴趣蛋白鉴定奠定良好基础。
【关键词】 血清小分子蛋白 磁珠 超滤离心管
【基金】国家863计划(2007AA02Z170) 国家自然科学基金(30370801) 湖南省研究生创新基金项目(2340-74236000010)
【分类号】R341
随着蛋白质组学分离技术的发展,辅以质谱技术的高通量和高分辨特性,曾经被当作噪音、生物垃圾、无意义的附属品[1-3]的血清小分子蛋白质开始吸引科学家的关注。研究者们认为它可以反映肿瘤的发生以及生物学特性,可能包含了丰富的、未开发的疾病特异性的诊断信息[4]。但是血清
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随着蛋白质组学分离技术的发展，辅以质谱技术的高通量和高分辨特性，曾经被当作噪音、生物垃圾、无意义的附属品的血清小分子蛋白质开始吸引科学家的关注。研究者们认为它可以反映肿瘤的发生以及生物学特性，可能包含了丰富的、未开发的疾病特异性的诊断信息。但是血清成分极其复杂，其中不仅包括了许多为人们所熟悉的血清蛋白，而且含有各种组织蛋白以及数量巨大的免疫蛋白片段，各种蛋白质及多肽的含量也差异巨大，横跨了超过10个数量级。除此之外，还混有大量的脂类、盐类等非蛋白质物质，这些物质和大分子量蛋白及其他高浓度蛋白质一起对血清小分子蛋白质的研究造成干扰。因此，选择合适的方法对血清中小分子蛋白质进行分离提纯，并脱脂脱盐，是研究工作的基础。磁珠是常用的一种血清小分子蛋白质分离提纯手段，目前已经有多种商业化磁珠可供选择，包括MB-WCX(Magnetic Beads based Weak Cation Exchange)，MB-IMAC Cu(Magnetic Beads based Immobilized Metal Ion Affinity Chromatography cu)和MB-RPCI8(Magnetic Beads based Reverse Phase C18)磁珠试剂盒，本实验对这三者的血清小分子蛋白质分离提纯能力进行了比较，同时，由于超滤离心管的简便和可操作性。在本实验中也将其纳入比较。
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