从转录水平研究SATB1表达调控的分子机制
SATB基因,启动子,’非翻译区,荧光素酶活性
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魏丹丹 张洪信 吴晓林 黄雷 顾鸣敏 王铸钢 上海交通大学医学院医学遗传学教研室;
【摘要】目的:研究SATB15’转录调控区及3’UTR的调控作用,以阐明SATB1在各肿瘤细胞系中的表达和调控机制。方法:采用半定量RT-PCR分析人乳腺癌细胞系BT549和MCF7、人肺癌细胞系NCI-H-446、QG56和SPC-A1中SATB1的转录水平,并利用Western Blot方法检测各肿瘤细胞系中蛋白表达水平。分别构建SATB1两个转录本5’上游序列驱动的报告基因载体,将载体瞬时转染QG56及SPC-A1。构建含SATB1基因3’非翻译区(3’UTR)的报告载体,瞬时转染NCI-H-446、QG56及SPC-A1。运用双通道荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。结果:在BT549、NCI-H-446、QG56和SPC-A1中检测到SATB1的转录本2,仅在BT549及QG56有转录本1表达;但在NCI-H-446、QG56及SPC-A1中,未检测到蛋白水平的表达。在QG56中,转录本1上游-638～+404序列段荧光素酶活性最高,而在SPC-A1中转录本2上游-1218～+48序列段的荧光素酶活性最高。运用生物信息学分析-638～+404和-1218～+48两个序列段的转录因子结合位点。在NCI-H-446中,含有SATB13’非翻译区(3’UTR)报告载体的荧光素酶活性显著低于PGL3control的活性(P0.05)。结论:在肺癌细胞中,SATB1的表达与细胞转移能力的高低无关。RT-PCR、荧光素酶活性及生物信息学分析结果的一致表明SATB1的两个转录本分别受其5’上游序列调控。在NCI-H-446中,SATB1的表达受其3’UTR的调控。
【关键词】 SATB基因 启动子 ’非翻译区 荧光素酶活性
【基金】国家科技支撑计划项目资助(2006BAI23B02)
【分类号】R730.231
前言SATB1是一种核基质结合蛋白,它通过锚定于其他基因的核基质结合区而形成致密的环状结构,进而招募染色质修饰酶类如组蛋白去乙酰化酶及转录因子,经过一系列复杂的调节过程,最终调节染色质结构及基因表达[1-4]。根据SATB1与核基质结合区相互作用以及所招募的染色质修饰酶类
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前言
SATB1是一种核基质结合蛋白，它通过锚定于其他基因的核基质结合区而形成致密的环状结构，进而招募染色质修饰酶类如组蛋白去乙酰化酶及转录因子，经过一系列复杂的调节过程，最终调节染色质结构及基因表达。根据SATB1与核基质结合区相互作用以及所招募的染色质修饰酶类的不同，该基因既能上调又可下调相关基因的表达。2005年，Nie H等学者报道小鼠Satb1主要表达在胸腺、脾脏及淋巴结中，在脑中也有少量的表达。它与位于CD8a上游4.5kb处的基质结合区结合，从而促进CD8的表达。CD8的表达在T淋巴细胞成熟过程中起重要的作用，因此在Satbl缺失的小鼠体内，CD8单阳性的T淋巴细胞含量显著下降。到2008年，HanHJ等人发现SATB1表达在高转移的乳腺癌细胞中，并且在低转移或不转移的乳腺癌细胞中不表达。其促进乳腺癌细胞转移的机制是激活转移相关基因.如参与细胞循环的分子，细胞黏附分子，转化生长因子信号分子，紧密连接分子，MAPK信号分子等，并且抑制抑癌基因的表达。从而促进乳腺癌细胞的转移。因此，鉴于SA7BI在肿瘤转移中的重要作用，研究其表达调节的分子机制就显得尤为必要。为了研究SA781的启动子及该基因3’UTR对基因表达的调控，本文构建了一系列由该基因5’转录调控区序列驱动的报告载体及3’UTR的报告载体，瞬时转染肿瘤细胞后，检测其荧光素酶的活性，最后分析该基因5’转录调控区的结构及对转录的作用，以及3’UTR对该基因翻译的调控。
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