西安地区EV71-VP1基因分析
肠道病毒l型,VP基因,逆转录聚合酶链反应,大肠杆菌BL
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黄娜 张国成 许东亮 豆玉凤 刘颖悦 杨晓蕾 第四军医大学西京医院儿科;
【摘要】目的:通过在原核表达系统初步构建EV71-VP1,对西安地区肠道病毒71型(EV71)的外壳蛋白VP1基因进行分析。方法:采集西安地区手足口病患儿的疱液、咽部分泌物进行病毒分离和RT-PCR检测;通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白VP1基因,构建重组表达质粒PQE30/VP1,转化到大肠杆菌BL21中,对VP1基因进行遗传学分析。结果:对肠道病毒71型(EV71)西安地方株VP1基因测序,并将其与阜阳株(序列号为EU913471)相比较,表明我国西安地区EV71分离株与阜阳株有较大差别,核苷酸差异约为4%。结论:西安地方株VP1基因与阜阳株相比,其核苷酸差异较为明显。这将为西安地区EV71的分子流行病学研究以及EV71所致疾病的预防和控制,打下良好的基础。
【关键词】 肠道病毒l型 VP基因 逆转录聚合酶链反应 大肠杆菌BL
【分类号】R512.5
前言肠道病毒71型(enterovirus71,EV71)为单股正链RNA病毒,连同Coxsackievirus A16(CoxA16)和CoxA10,被认为是引起手足口病(hand,foot and mouth disease,HFMD)的主要病原[1]。与柯萨奇病毒的致病性不同,EV71能引起包括中枢神经系统疾病在内的多种并发症。目前已知EV71的感染
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EV71主要是由VPl、VP2、VP3和VP4四种外壳蛋白构成，其中，VPl基因最具研究价值。首先，VPl蛋白是主要的病毒中和决定因子，它直接决定病毒的抗原性；其次，VPl基因具有与病毒血清型完全对应遗传多样性Ln。通过收集2009年西安市西京医院儿科HFMD的患儿的疱液、咽拭子，进行病毒分离及R7-PCR技术，获取EV71的VPl目的基因，将其与PQE30载体连接，构建质粒，对EV71西安地方株VPl基因进行遗传学研究，以利于研究其特性，开展EV71地区性的预防和控制工作。
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