人Stathmin基因siRNA腺病毒载体的构建及病毒鉴定
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潘娜 马楠 解放军第451医院;解放军第四军医大学唐都医院;
【摘要】目的:为了寻求解决非特异性杀伤作用的星形细胞瘤的基因治疗问题的新途径。本研究构建带有StathminsiRNA的复制缺陷腺病毒载体并包装病毒。方法:(1)两个目标siRNA基因片段合成并分别插入pSilencer4.1-CMV载体中从而构建两个重组真核表达载体:pSilencer4.1-CMV-S1和pSilencer4.1-CMV-S2。(2)用EcoR I和BamH Ⅲ双酶切pSilencer4.1-CMV-S1和pSilencer4.1-CMV-S2,将目的片段分别装进穿梭质粒,从而构建pShuttle-CMV neo-S1和pShuttle-CMV neo-S2。以独特的限制性内切酶PI-Sce I合I-CeuI双酶切这两个穿梭质粒并重组至骨架Adeno-XTMViral DNA上。并以PCR方法来鉴定。(3)线性化Ad-pShuttle-CMV neo-S1和Ad-pShuttle-CMV neo-S2并转染入HEK293细胞,出毒后进行PCR毒种鉴定和滴度分析。结果:(1)酶切分析和DNA测序表明,小干扰RNA片段的成功连接到pSilencer4.1-CMV载体上分别。(2)酶切分析表明两个目的基因片段,都分别成功连接入穿梭载体pShuttle。PCR表明pShuttle-CMV neo-S1和pShuttle-CMV neo-S2分别与骨架重组成功。(3)腺病毒DNA进行PCR鉴定后表明成功地在体外重组并生产出腺病毒。且冻融产毒细胞保证了较高的重组腺病毒滴度。结论:Adeno-XTM系统是一个能简单而有效生产能表达目的基因腺病毒的系统。我们构建的腺病毒有望成为星形细胞瘤新的高效而安全的治疗方法。
【关键词】 RAN 干扰 腺病毒 stathmin基因
【分类号】R346
前言星形细胞瘤(Astrocytoma)是人类常见的恶性脑肿瘤之一,也是脑胶质瘤中最常见的病理类型。病理分型为Ⅰ级(星形细胞瘤),Ⅱ级(星形母细胞瘤),Ⅲ～Ⅳ级(多形胶母细胞瘤)。Ⅰ～Ⅱ级星形细胞瘤为低度恶性,起病缓慢,Ⅲ～Ⅳ级的多形胶母细胞瘤起病快速,为恶性度最高的肿瘤。Stath
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前言
星形细胞瘤(AsbocytOnm)是人类常见的恶性脑肿瘤之一，也是脑胶质瘤中最常见的病理类型。病理分型为I级(星形细胞瘤)，Ⅱ级(星形母细胞瘤)，Ⅲ～Ⅳ级(多形胶母细胞瘤)。I～II级星形细胞瘤为低度恶性，起病缓慢，Ⅲ一Ⅳ级的多形胶母细胞瘤起病快速，为恶性度最高的肿瘤。
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