Tet-on和Cre/loxP系统双重调控HCV NS5B真核表达载体的设计与构建
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马玉 赵亚 孙梦宁 兰海云 吕欣 杨敬 雷迎峰 姚敏 尹文 汪爱勤 第四军医大学基础部微生物学与病原生物学教研室;第四军医大学中心实验室;
【摘要】目的:构建可受Tet-on和Cre/loxP系统双调控的HCV NS5B真核表达载体,为建立可严格调控HCVNS5B蛋白表达的转基因小鼠奠定基础。方法:以真核表达载体pBI-3为载体构建骨架,在其启动子下游依次插入luc报告基因、BGHpA和NS5B基因片段,并分别在luc报告基因上游和BGHpA尾下游引入一个loxP位点。结果:成功构建了可受Tet-on和Cre/loxP系统双调控的HCV NS5B真核表达载体pBI-3/luc-BGHpA-NS5B。结论:pBI-3/luc-BGHpA-NS5B真核表达载体的成功构建为可严格调控HCV NS5B蛋白表达转基因小鼠的建立打下了良好的基础。
【关键词】 HCV NSB 转基因小鼠 Tet-on Cre/loxP
【基金】国家高技术研究发展计划专题(863计划专题)(2007AA02Z154) 国家自然科学基金(30872218) 陕西省科技攻关计划(2010K15-03-04)
【分类号】Q78
前言丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肝病的主要致病因子[1]。HCV感染后往往发展成为慢性肝炎、肝硬化和肝癌[2]。目前尚无有效的疫苗和抗病毒药物用于临床,而缺少稳定可靠的HCV感染动物模型大大限制了抗HCV疫苗和抗病毒药物的研究[3,4]。HCV NS5B蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶活性,在
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丙型肝炎病毒(HCV)是慢性肝病的主要致病因子。HCV感染后往往发展成为慢性肝炎、肝硬化和肝癌。目前尚无有效的疫苗和抗病毒药物用于临床，而缺少稳定可靠的HCV感染动物模型大大限制了抗HCV疫苗和抗病毒药物的研究。HCVNS5B蛋白具有RNA依赖的RNA聚合酶活性，在病毒基因组复制中起着关键的作用，抑制其酶活性会降低HCV在肝细胞中的复制。因此，HCVNS5B蛋白是抗HCV感染研究和抗HCV新型药物的重要靶点之一，以它为靶点建立转基因小鼠標型在HCV相关研究中具有良好的前景。
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