新型RNAi载体抑制HPV16E6基因在人宫颈癌细胞CaSki中的表达
新型RNAi载体抑制HPV16E6基因在人宫颈癌细胞Caski中的表达,RNA干扰,Semliki森林病毒,病毒载体
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杨峥嵘 何飞 李蓉 王海峰 深圳市疾病预防控制中心艾滋病实验室;清华大学深圳研究生院生物医药研究中心;深圳市人民医院口腔医学中心;第三军医大学复合伤研究所;
【摘要】目的:利用自行构建的一种基于Semliki森林病毒的新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready,验证将其用于短期高效沉默HPV16E6基因的效果。方法:以HPV16E6为靶标基因,设计并构建基于pSFV-RNAi Ready的重组质粒,分直接电击转染和病毒颗粒共培养两种方式转入人宫颈癌细胞株Caski,RT-PCR、Western blot检测HPV16E6表达水平。结果:重组质粒对HPV16E6沉默效果优于常规RNAi质料载体,接近化学合成小RNA,抑制率可高达90%以上,10天后效果仍然存在;结论:新型RNAi载体pSFV-RNAi Ready可较好地应用于特异高丰度靶基因的表达抑制,有望用于未来的科学研究或治疗应用。
【关键词】 RNA干扰 Semliki森林病毒 病毒载体 宫颈癌
【基金】中国博士后基金项目(20060390073) 深圳市科技计划项目
【分类号】Q784
前言RNA干涉(RNA interference,RNAi)近年来在基因分析和基因治疗研究中应用日益广泛,但在解决RNA给药途径言及RNA稳定性上仍面临质疑。利用载体表达抑制时间相对较长,能部分解决药物稳定性和组织特异性的问题,但往往表达效率不够高,在形成局部siRNA浓度及抑制效果上均明显不
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前言
RNA干涉(RNA intcrfCrence，RNAi)近年来在基因分析和基因治疗研究中应用日益广泛，但在解决RNA给药途径言及RNA稳定性上仍面临质疑。利用载体表达抑制时间相对较长，能部分解决药物稳定性和组织特异性的问题，但往往表达效率不够高，在形成局部siRNA浓度及抑制效果上均明显不如化学合成siRNA，尤其是当面对表达丰度特别高的特定基因(如患者体内致病/癌基因)时普遍效果欠佳，而表达效率较高的病毒载体如腺病毒则又易受宿主细胞抗病毒免疫等影响，使用受限。
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