脂肪储存小滴蛋白5重组腺病毒的制备
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薛玲 李航 张静 王净 吴雅岚 姬秋和 叶菁 第四军医大学西京医院内分泌代谢科;第四军医大学病理与病理生理学教研室;第四军医大学唐都医院耳鼻喉科;
【摘要】目的:利用AdEasy腺病毒表达系统构建含有小鼠脂肪储存小滴蛋白5(LSDP5)基因的重组腺病毒。方法:从小鼠肝脏cDNA克隆出LSDP5基因全长,克隆至pMD18-T载体中,酶切测序。回收酶切产物,连接到腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV,构建pShuttle-CMV-LSDP5重组质粒,经PmeI酶切线性化后转化至含有腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183中。筛选阳性克隆,提取重组质粒,PacI酶切线性化并转染AD293细胞进行包装,提取病毒DNA,鉴定重组病毒并检测病毒滴度。结果:LSDP5基因克隆经测序证实与Genebank公布一致,双酶切重组pMD18-T载体得到1400 bp左右的片段。重组穿梭载体经Kpn I和Sal I双酶切后得到预期片段。PacI酶切得到30 Kb大片段和4.5 Kb小片段。转染AD293细胞后收集病毒,经PCR鉴定,获得理想的目的片段。取病毒上清反复感染AD293细胞以扩增病毒,最后所得病毒滴度为2.5×109pfu/ml。结论:成功构建了携带脂肪储存小滴蛋白5基因的重组腺病毒载体,为进一步研究LSDP5基因功能奠定基础。
【关键词】 AdEasy腺病毒 LSDP 小鼠
【基金】国家自然科学基金(30700268,81070249)
【分类号】Q75
前言脂肪代谢异常与多种疾病相关,如高脂血症、冠心病、糖尿病等,这些疾病患者的非脂肪组织细胞内有过量脂质堆积。Michio S等人的研究发现,细胞内脂肪可通过多种途径破坏正常细胞的功能[1,2]。PAT家族蛋白是脂滴表面的主要结构蛋白,包括per-ilipin、ADRP、TIP47、S3-12和LSDP
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前言
脂肪代谢异常与多种疾病相关，如高脂血症、冠心病、糖尿病等，这些疾病患者的非脂肪组织细胞内有过量脂质堆积。Michio S等人的研究发现，细胞内脂肪可通过多种途径破坏正常细胞的功能。
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