端粒酶shRNA慢病毒载体的构建及转染人类胚胎干细胞
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曾思聪 周菂 卢光琇 中南大学生殖与干细胞工程研究所人类干细胞国家工程研究中心;
【摘要】目的:构建端粒酶shRNA慢病毒载体及建立端粒酶稳定干扰的人类胚胎干细胞系。方法:将端粒酶基因特异性shRNA靶序列与慢病毒载体PLKO.1-puro连接、转化、挑取阳性克隆进行PCR及测序鉴定;利用包装细胞293T获得重组的慢病毒,感染人类胚胎干细胞,分为干扰组ShTert、载体组vector和野生型组wt;Realtime-PCR检测端粒酶mRNA的表达。结果:经PCR和DNA测序鉴定,成功构建端粒酶特异性shRNA慢病毒载体,并感染人类胚胎干细胞;经检测shTert组端粒酶mRNA表达较vector和wt组明显降低,vector组和wt组之间无明显差异。结论:通过成功构建的端粒酶特异性shRNA慢病毒载体对人类胚胎干细胞的转染实现了对其端粒酶mRNA的调控。
【关键词】 人类胚胎干细胞 慢病毒载体 转染
【基金】国家重点基础研究发展计划(973计划)(2007CB948103) 中国高技术发展研究计划(863计划)(2006AA02A102) 湖南省科技计划项目(2008FJ3133)
【分类号】Q78
前言人类胚胎干细胞具有高度自我更新、长期增殖及多向分化潜能,研究和利用人类胚胎干细胞在当前生物医学领域越来越受到重视,然而有效转染人类ES细胞却成为了该领域的瓶颈问题之一。人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)改造的慢病毒载体(lentivirus vector)既可感染分裂细胞,也可感染
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前言
人类胚胎干细胞具有高度自我更新、长期增殖及多向分化潜能，研究和利用人类胚胎干细胞在当前生物医学领域越来越受到重视，然而有效转染人类Es细胞却成为了该领域的瓶颈问题之一。人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)改造的慢病毒载体(lentivims vector)既可感染分裂细胞，也可感染非分裂细胞，如神经细胞、干细胞等，还具有整合到宿主细胞基因组、稳定长效转染、感染效率高等优点，是千细胞基因功能研究和基因治疗中不可多得的优良载体。
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