人胚胎干细胞支原体感染的检测和控制
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邓磊玉 林戈 卢光琇 中南大学生殖与干细胞工程研究所人类干细胞国家工程研究中心;
【摘要】目的:优化检测人胚胎干细胞支原体感染的方法,寻找控制支原体感染的途径。方法:利用hoeshest33258染色检测感染支原体的人胚胎干细胞,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞,比较两种方法检测效果;利用RNApolymeraseⅡ作为新的鉴定指标,直接检测感染支原体的人胚胎干细胞;利用抗支原体药物对感染细胞进行处理,检测处理后细胞的感染状态。结果:hoechest33258染色后,受支原体感染人胚胎干细胞检测效果不明显,接触感染培养基的人胚胎成纤维细胞在培养7天后有拉丝状染色分布;RNApolymeraseⅡ染色则能直接检测出受感染的人胚胎干细胞表面粘附的支原体;利用抗支原体药物Plasmocin对感染细胞进行处理后hoechest33258拉丝状染色基本消失,但持续培养后重新出现。结论:间接法使用hoechest33258染色或者直接利用RNApolymeraseⅡ染色都能够很好地检测人胚胎干细胞培养过程中的支原体感染。抗支原体药物Plasmocin能够有效减轻支原体感染情况,但是不能完全杀灭支原体。
【关键词】 人胚胎干细胞 支原体 免疫荧光 抗支原体药物
【基金】国家高技术研究发展计划(863项目)(2006AA02A102) 国家重点基础研究发展计划(973项目)(2007CB948103) 高等学校博士学科点专项科研基金(20090162110017)
【分类号】R375
前言人胚胎干细胞具有不断增殖的能力,这为得到大量的移植细胞提供了可能[1],但长期培养过程中可能受到的微生物感染是需要排除的安全隐患。支原体感染与细菌或真菌感染不同,培养物在短时间内没有明显的肉眼可见的性状改变,但一旦支原体繁殖旺盛就会对细胞的生长状态和使用造
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前言
人胚胎干细胞具有不斷增殖的能力，这为得到大量的移植细胞提供了可能，但长期培养过程中可能受到的微生物感染是需要排除的安全隐患。支原体感染与细菌或真菌感染不同，培养物在短时间内没有明显的肉眼可见的性状改变，但一旦支原体繁殖旺盛就会对细胞的生长状态和使用造成严重影响，并且容易在细胞株间交叉感染。支原体感染后的人胚胎干细胞不仅会状态不佳，且会带来遗传物质不稳定的隐患。当实验室出现支原体感染的细胞时，容易与其它细胞交叉感染，带来更多的危害。本文将对支原体感染的检测及防治方法进行探讨。
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