罗岚，刘洪洪，李祥，范开

    1995年Wiley 等[1]利用表达序列标签(EST)的方法在人心肌细胞 cDNA 文库中鉴定出肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor，TNF)家族凋亡诱导分子的一个新成员——肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand，TRAIL)，TRAIL 通过与其相关受体结合，可诱导细胞发生凋亡。与 TNF 家族的另外 2 种凋亡诱导分子(TNF-α、Fas-L)相比，TRAIL 具有如下特点：①持续地表达于大多数正常细胞中，具有强大诱导肿瘤细胞凋亡的能力，且对正常细胞基本无影响；②比 Fas-L 具有更广的抗癌谱；③对核因子NF-κB 仅有很微弱的激活作用，即使是全身用药，也不会产生类似 TNF-α 的严重炎症反应。因此，TRAIL 被认为是一种更为安全且极具潜力的抗肿瘤蛋白[2]。

    TRAIL 重组蛋白主要利用大肠杆菌以包涵体形式表达，经复性、纯化后得到含 Zn2+的三聚体活性结构。目前，TRAIL 重组蛋白已进入临床研究阶段，美国 Amgen/gentech 公司研发的 TRAIL 重组蛋白产品已进入 II 期临床试验阶段，在国内相同 TRAIL 重组蛋白产品也已进入 I、II 期临床试验阶段，研究结果显示 TRAIL 重组蛋白联合化疗的抗肿瘤疗效明显，但半衰期较短[3]。为了进一步证实其作用，我们对 CHO 真核表达系统制备的含人抗体 Fc 片段的 TRAIL(TRAIL-Fc)重组融合蛋白在体内外的抗肿瘤活性进行了初步评价。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂与仪器 TRAIL-Fc 重组融合蛋白冻干粉，1 mg/支，纯度 95%，由 CHO 真核表达系统表达制备，其中人 IgG 抗体 Fc 片段位于重组融合蛋白的 C 端，TRAIL 蛋白位于其 N 端，购自重庆富进生物医药有限公司；TRAIL 对照品冻干粉，1 mg/支，纯度 95%，由大肠杆菌表达制备，购自深圳新鹏生物工程有限公司；5-氟尿嘧啶注射液(5-Fu)，10 ml/0.25 g，购自上海旭东海普药业有限公司；RPMI-1640、DMEM 培养基和胎牛血清购自美国 Hyclone 公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)购自上海生工生物工程技术服务有限公司；其余试剂均为国产分析纯。Spectra MAX 190 全波长酶标仪为美国Dynex公司产品。

    1.1.2 细胞株 人急性 T 淋巴细胞白血病Jurkat 悬浮细胞、人结肠癌 LOVO 贴壁细胞、人胃癌 MKN45 贴壁细胞、人表皮癌 A431 贴壁细胞、人肝癌 HEPG2 贴壁细胞、人乳腺癌 MCF-7贴壁细胞均购自上海细胞库和武汉大学中国典型培养物保藏中心 ......