赛岩，代学强，白纪民，刘勇，常菁，范礼斌，崔春萍

    鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移

    赛岩，代学强，白纪民，刘勇，常菁，范礼斌，崔春萍

    目的确定鞘氨醇激酶(SPK)在肝癌转移中的作用。

    方法用 Ad-SPK1 腺病毒感染肝癌细胞 LM-3 使其 SPK过表达，Western blot 检测 SPK1 表达及激活情况；Transwell、划痕实验检测肝癌细胞迁移情况。体外管状结构形成实验检测 SPK 对脐静脉内皮细胞(HUVEC)管状化形成的影响。建立 SPK 过表达裸鼠模型，体内检测肝癌迁移情况。

    结果在体外 SPK 对肝癌细胞的迁移无显著影响；Ad-SPK 能够促进 HUVEC 管状结构形成；裸鼠皮下移植瘤结果显示 Ad-SPK 促进肿瘤生长和转移。

    结论鞘氨醇激酶通过调控血管发生促进肝癌转移。

    疾病模型，动物； 肝肿瘤； 肿瘤移植； 移植，异种； 鞘氨醇激酶

    1 材料和方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验动物和细胞 BALB/c 裸鼠，雌性，4 周龄，体重 16 ～ 18 g，购自军事医学科学院实验动物中心，饲养于解放军总医院 SPF 级动物房。人肝癌细胞 LM-3 购自中国科学院上海细胞库；人脐静脉内皮细胞(HUVEC)购自中国协和细胞库；人胚肾细胞(HEK293)购自中国科学院上海细胞库。

    1.1.2 主要试剂与仪器 BCA-200 蛋白检测试剂盒购自美国 Pierce 公司；蛋白质分子量标准购于北京全式金生物技术公司；DMEM 培养基、小牛血清购自美国 Gibco 公司；ECM 培养基、内皮细胞生长添加物(ECGS)均购自美国 ScienCell 公司；胰蛋白酶购自美国 Sigma 公司；基质胶(Matrigel 胶)购自美国 BD 公司；SPK1 抗体购自美国 Abcam 公司；GAPDH 抗体购自中杉金桥公司；其他试剂均为国产分析纯试剂。细胞培养器材购自美国 Costar 公司；电泳仪、转膜仪为美国Bio-Rad 公司产品。

    1.2 方法

    1.2.1 Ad-SPK 的扩增、纯化及滴度的测定 将HEK293 细胞接种于 150 mm 平皿中，待细胞生长至 90% 汇合状态时，加入 Ad-SPK1 病毒，感染复数(multiplicity of infection，MOI)约为 10 个蚀斑形成单位(plaque forming unit，pfu)/细胞[7]，36 ～ 48 h 后 ......