含组氨酸标签的小分子抗体临床应用现状
免疫原性,同位素,1组氨酸标签简介,2组氨酸标签是特定的同位素标记位点,3组氨酸标签的非免疫原性,4含组氨酸标签小分子抗体的临床研究,5小结
刘晓,屈琳,黄昌发,余馨,罗勤单链抗体(scFv)是由免疫球蛋白的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一条连接肽,如 (GGGGS)4连接而成的小分子抗体(图 1)。与全抗相比,它因分子小、容易进入实体肿瘤、体内清除快、免疫原性低、成像清晰等优点成为目前医用抗体研究的热点[1]。另外,单链抗体易于实现基因操作,可采用微生物细胞规模生产,因而相对于哺乳动物细胞生产线,其制造成本低,在制药工业得到了广泛的应用。重组蛋白质药物生产的关键技术之一是目的蛋白的纯化,即如何将重组蛋白从微生物细胞产生的总蛋白中分离纯化出来。使用蛋白标签进行亲和纯化是目前最有效的蛋白分离纯化方法。近年来,多种蛋白标签相继发明应用。其中,组氨酸标签 [(His)6-Tag] 由于其分子量小,被广泛应用于重组蛋白的亲和纯化。此外,组氨酸标签还可用于蛋白的定性定量检测,最近还发现组氨酸标签可用于特定同位素标记。因此,组氨酸标签在医用蛋白,包括小分子抗体中的应用已经越来越普遍。本文综述了含组氨酸标签小分子抗体在生物制药领域中的应用现状,以期为组氨酸标签在重组蛋白药物中的应用提供有价值的参考。
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图 1 抗体结构图
1 组氨酸标签简介
组氨酸标签一般由连续 6 个组氨酸组成,即 (His)6,连续 5 ~ 9 个组氨酸标签也有报道,可直接连接到蛋白N-端或 C-端,产生融合蛋白,一般不影响蛋白的结构及功能。组氨酸标签特定结合 NTA(氨基三乙酸)金属离子络合物(图 2),其亲合力为 1 μmol/L。Ni2+是常用的金属离子,其他离子,如 Co2+、Cu2+、Zn2+也可使用。
NTA 可固定到不同的固相载体上,从而产生不同类型的层析柱。固定化金属亲和层析(immobilised metal affinity chromatography,IMAC)是广泛使用的亲和分离纯化技术[2]。该技术操作简单、快速,可在天然或变性条件下,一步将目标蛋白从总细胞液中分离出来。许多酶或荧光标记的特定抗体和 NTA 衍生物也相继出现,它们都是检测组氨酸标签的灵敏试剂。
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