刘晓，屈琳，黄昌发，余馨，罗勤

    单链抗体(scFv)是由免疫球蛋白的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)通过一条连接肽，如 (GGGGS)4连接而成的小分子抗体(图 1)。与全抗相比，它因分子小、容易进入实体肿瘤、体内清除快、免疫原性低、成像清晰等优点成为目前医用抗体研究的热点[1]。另外，单链抗体易于实现基因操作，可采用微生物细胞规模生产，因而相对于哺乳动物细胞生产线，其制造成本低，在制药工业得到了广泛的应用。重组蛋白质药物生产的关键技术之一是目的蛋白的纯化，即如何将重组蛋白从微生物细胞产生的总蛋白中分离纯化出来。使用蛋白标签进行亲和纯化是目前最有效的蛋白分离纯化方法。近年来，多种蛋白标签相继发明应用。其中，组氨酸标签 [(His)6-Tag] 由于其分子量小，被广泛应用于重组蛋白的亲和纯化。此外，组氨酸标签还可用于蛋白的定性定量检测，最近还发现组氨酸标签可用于特定同位素标记。因此，组氨酸标签在医用蛋白，包括小分子抗体中的应用已经越来越普遍。本文综述了含组氨酸标签小分子抗体在生物制药领域中的应用现状，以期为组氨酸标签在重组蛋白药物中的应用提供有价值的参考。

    图 1 抗体结构图

    1 组氨酸标签简介

    组氨酸标签一般由连续 6 个组氨酸组成，即 (His)6，连续 5 ～ 9 个组氨酸标签也有报道，可直接连接到蛋白N-端或 C-端，产生融合蛋白，一般不影响蛋白的结构及功能。组氨酸标签特定结合 NTA(氨基三乙酸)金属离子络合物(图 2)，其亲合力为 1 μmol/L。Ni2+是常用的金属离子，其他离子，如 Co2+、Cu2+、Zn2+也可使用。

    NTA 可固定到不同的固相载体上，从而产生不同类型的层析柱。固定化金属亲和层析(immobilised metal affinity chromatography，IMAC)是广泛使用的亲和分离纯化技术[2]。该技术操作简单、快速，可在天然或变性条件下，一步将目标蛋白从总细胞液中分离出来。许多酶或荧光标记的特定抗体和 NTA 衍生物也相继出现，它们都是检测组氨酸标签的灵敏试剂。 ......