王琦，蒋敬庭，魏文祥

    B7-H4实时荧光定量PCR检测方法的建立及其在人胃癌组织中的初步应用

    王琦，蒋敬庭，魏文祥

    215123 苏州大学医学部基础医学与生物科学学院细胞与分子生物学教研室(王琦、魏文祥)；213003 常州，苏州大学附属第三医院肿瘤生物诊疗中心(蒋敬庭)

    建立实时荧光定量 PCR 检测B7-H4 的方法并初步应用于人胃癌组织。

    将 B7-H4 和内参 GAPDH 的 PCR 扩增产物经测序鉴定正确后克隆入载体 pMD19-T，构建重组质粒标准品，并纯化、定量及梯度稀释，分别建立 B7-H4 和 GAPDH 的标准曲线，应用实时荧光定量 PCR 检测 8 例人胃癌组织中的 B7-H4 相对于 GAPDH 的表达情况。

    B7-H4 的最低检测拷贝数为 5.27 拷贝，线性范围 5.27 × 101~ 5.27 × 107拷贝，标准曲线方程 y = –3.1395 x + 41.805，直线回归相关系数= 0.994 904，批间变异系数范围 2.39% ~ 3.59%，扩增效率 108.2%；GAPDH 的最低检测拷贝数为 38.6 拷贝，线性范围 3.86 × 102~ 3.86 × 107拷贝，标准曲线方程 y = –3.2436x + 41.083，直线回归相关系数= 0.998 913，批间变异系数范围 2.26% ~ 3.86%，扩增效率 103.4%。8 例人胃癌组织的 B7-H4 相对于 GAPDH mRNA 表达水平在 0.044 ~ 0.888 之间。

    荧光定量 PCR 检测 B7-H4 的方法具备较高的敏感性和特异性，且系统有良好的重复性和线性范围。

    胃肿瘤； 实时荧光定量 PCR； B7-H4

    B7 家族属于提供第二信号的共刺激分子免疫球蛋白超家族，通过向 T 细胞传递协同刺激信号在 T 细胞充分活化和功能发挥中起着重要的作用。目前报道发现的 B7 家族分子共有 7 种，对 B7 家族分子进行系统发育学比较，可将 B7 家族分子分为三组：I 组包括 B7-1(CD80)、B7-2(CD86)和 B7-H2[1-4](B7 homolog 2，又称 GL50、B7h、B7RP-1、ICOS-L)；II 组包括 B7-H1[5-6](B7 homolog 1，又称 Programmed death-1 ligand 1 即：PD-L1)和 B7-DC[7](又称 Programmed death-1 ligand 2 即：PD-L2)；III 组包括 B7-H3[8](B7 homolog 3)和 B7-H4[9](B7 homolog 4 又称 B7S1 和 B7x) ......