邹文焘，刘广鹏，孙剑，崔磊

    应用酶联免疫法检测组织工程骨牛血清白蛋白残余量的实验研究

    邹文焘，刘广鹏，孙剑，崔磊

    200072 上海，同济大学附属第十人民医院耳鼻咽喉头颈外科(邹文焘)，整形外科(刘广鹏)；200235 上海组织工程研究与开发中心(孙剑、崔磊)

    检测常规体外构建的组织工程骨中牛血清白蛋白残余量，并探讨减少其残留量的方法。

    体外分离培养人骨髓基质干细胞，取第 2 代细胞(P2)接种于完全脱钙骨支架材料并成骨诱导培养 2 周，体外构建组织工程骨。成骨诱导液为含 10% 胎牛血清的条件培养液，并于检测前 1 天更换为无血清的条件培养液。待测组织工程骨先经 1:100(v:v)生理盐水浸洗 3 次，然后加入磷酸盐缓冲液(PBS)，37 ℃振荡浸提 24 h，获取浸提液。同法获取未接种细胞的单纯支架材料的浸提液作为对照组。采用酶联免疫法检测样品浸提液中牛血清白蛋白的残余量，比较两者牛血清白蛋白残余量的差异。

    经生理盐水洗涤 3 次后，洗涤液中的牛血清白蛋白含量明显降低。酶联免疫法测定的组织工程骨与单纯支架材料的牛血清白蛋白残余量分别为(15.57 ± 5.82)ng 和(14.85 ± 5.06)ng，单位重量的牛血清白蛋白残余量分别为(0.254 ± 0.088)ng/mg 和(0.306 ± 0.079)ng/mg，两组相比均无显著性差异(> 0.05，n = 10)。

    酶联免疫法适用于组织工程骨中牛血清白蛋白残余量的检测。因为支架材料较细胞更易吸附牛血清白蛋白，现有条件下构建的组织工程骨牛血清白蛋白残余量仍然较高，需要继续探索降低其残余含量的新方法。

    血清白蛋白，牛； 酶联免疫吸附测定； 组织工程骨； 残余量

    胎牛血清(fetal bovine serum, FBS)是重要的细胞培养介质，其主要成分有牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)、免疫球蛋白、转铁蛋白及其他细胞生长因子等。而 BSA是其中含量最高的蛋白质成分(> 40%)，作为异种蛋白，BSA 残余量过高会导致人体过敏反应。因此药典规定疫苗成品的 BSA 残余量每件不超过 50 ng[1]。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 试剂 定量检测牛血清白蛋白酶联免疫试剂盒(40 ng/ml)，购自无锡博生医用生物技术开发有限公司；DMEM 低糖培养基购自 Gibco 公司；FBS 购自 Hyclone 公司；地塞米松、β-磷酸甘油钠和维生素 C 为美国 Sigma 公司产品 ......