林淑娴，杨芳芳，彭毅，李研，方毅敏，黎意芬，赖小敏

    酶联免疫斑点法对抗结核治疗期肺结核患者多肽特异性IFN-γ的检测

    林淑娴，杨芳芳，彭毅，李研，方毅敏，黎意芬，赖小敏

    510080 广州，中山大学中山医学院微生物教研室，热带病防治研究教育部重点实验室，海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室，广东省重大传染病预防和控制技术中心(林淑娴、杨芳芳、彭毅、李研、赖小敏)；510095 广州市胸科医院内科(方毅敏、黎意芬)

    运用酶联免疫斑点法检测结核患者外周血 IFN-γ，探讨结核患者结核多肽特异性 IFN-γ 分泌水平随抗结核治疗的变化。

    采用结核混合多肽 E6 + E7 + C14、E6 + E7 作为刺激抗原，对 331 个处于治疗前或 1、2、3、4、5 和 6 个月治疗期的肺结核患者外周血标本进行多肽特异性 IFN-γ 酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测。

    治疗前的肺结核患者其 ELISPOT 阳性检测率均高于痰涂片和痰培养阳性率(E6 + E7 + C14-ELISPOT 92.5%、E6 + E7-ELISPOT 89.7%、痰涂片 41.0%、痰培养 59.0%)，且差别均有统计学意义(1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 主要试剂和仪器 96 孔 ELISPOT 板购自美国 Millipore 公司；包被抗体(anti-human IFN-γ)、生物素标记抗人 IFN-γ 抗体购自美国 eBioscience 公司；碱性磷酸酶标记的链霉亲和素，底物 NBT、BCIP 均购自美国 Thermo 公司；RPMI 1640 培养基购于美国 Gibco 公司；新生小牛血清购于澳大利亚 HyClone 公司；淋巴细胞分离液购于荷兰 Amersham Bioscience 公司；ELISPOT 读板系统购于美国 Cellular Technology 公司。E7(中国授权发明专利号：200810220523.1)、E6(中国发明专利公开号：201110130364.8)、C14 多肽委托西安华辰生物科技有限公司合成，纯度为 98%，其中 E6、E7 来源于 MTB 分泌性蛋白 ESAT-6，C14 则来源于另外一种分泌性蛋白 CFP-10。

    1.1.2 标本来源 共纳入结核患者 331 例，男性 225 人，女性 106 人，年龄中位数(M)为 41(四分位间距：27 - 52)。全部患者均依据临床表现、细菌学、影像学或抗结核药物疗效明确诊断为肺结核 ......