吴新正，田道法，戴娜，何迎春，刘刚，刘湘

    益气解毒方对TgN(p53mt-LMP1)/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞周期相关蛋白的影响

    吴新正，田道法，戴娜，何迎春，刘刚，刘湘

    410006 长沙，湖南省第二人民医院耳鼻喉-头颈外科(吴新正、刘刚)；410208 长沙，湖南中医药大学中西医结合学院(田道法、何迎春、刘湘)，第二中医临床学院 2008 级(戴娜)，干细胞中药调控与应用实验室(何迎春)；421001 湖南衡阳，南华大学医学院(何迎春)

    研究益气解毒方对 TgN(p53mt-LMP1)/HT 转基因小鼠鼻咽黏膜上皮细胞周期相关蛋白 p53、p21、CDK2和 cyclinD1的影响。

    TgN(p53mt-LMP1)/HT 转基因小鼠随机分为 3 组，分别为模型组(MG)、益气解毒方干预组(YG)、维甲酸阳性对照组(TG)，每组 24 只；同品系 C57BL/6J 鼠 24 只作对照组(CG)。各组均用诱癌剂二亚硝基哌嗪进行处理(每次剂量73 mg/kg，每周 2 次，共 28 次)。采用免疫组织化学染色法检测小鼠鼻咽黏膜上皮细胞周期相关蛋白 p53、p21、CDK2和 cyclinD1的表达水平，并采用 Western blot 法进行验证。

    YG 组、TG 组及CG 组 p53 蛋白和 cyclinD1蛋白表达均显著低于 MG 组(1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 实验动物 G8代5 月龄TgN(p53mt- LMP1)/HT 转基因阳性小鼠(中科动管会第 001号)为本课题组繁殖[1-2]，同品系同龄C57BL/6J 小鼠购自中国医学科学院实验动物研究所，雌雄各半。

    1.1.2 主要试剂与药品 SP-9001 兔 SP 检测试剂盒(511783A)、SP-9002 小鼠 SP 检测试盒(465909A)、鼠抗P21(A1209)、鼠抗 cyclinD1(A2709)、兔抗 P53(C1609)均为北京中杉生物技术有限公司产品；羊抗鼠IgG(H + L)、羊抗兔 IgG(H + L)、兔抗CDK2均为武汉博士德生物工程公司产品；维甲酸片剂(10 mg/片，批号：08054)购自山东良福制药有限公司；益气解毒方(由黄芪、黄连、党参、天花粉、茯苓、白花蛇舌草和甘草组成)中药饮片购自湖南中医药大学第一附属医院；二亚硝基哌嗪为国产分析纯。

    1.2 方法

    1.2.1 药品制备 益气解毒方浓缩煎液的制备参照文献[3-4]所述方法进行 ......