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编号:1224244
酒曲生物转化降解河豚毒素的初步研究
http://www.100md.com 2013年11月30日 中国医药生物技术 2013年第4期
培养箱,恒温,1材料与方法,2方法,2结果,1抑菌实验确定TTX初始浓度,2条件优化,3小鼠法检测结果,3讨论
     贾晋斌,舒静,彭锐,孙惠川,王文权,崔安雷

    河豚毒素(tetrodotoxin,TTX)是一种氨基全羟基喹唑啉化合物,通常以“两性离子”的形式存在[1],是豚毒鱼类及其他生物体内含有的一种生物碱,也是一种剧毒的非蛋白质天然神经毒素。TTX为毒性极强的生物毒素之一,其毒性比氰化钾强1250 倍,且无有效的解毒剂[2]。河豚毒素中毒后,潜伏期短、病死率高,吸收后迅速作用于末梢神经和中枢神经系统,使神经传导障碍,首先感觉神经麻痹,后运动神经麻痹,严重的脑干麻痹导致呼吸循环衰竭[3]。

    目前国内外对河豚毒素的微生物来源、性质以及河豚鱼源的河豚毒素提取和检测方面研究颇多,但微生物能否降解河豚毒素尚未见报道。在日本石川县,用河豚卵巢做的米糠浸渍酱菜,是将河豚的卵巢用盐腌藏以后,再放入米糠中让其发酵,经过盐渍一段时间后,河豚鱼的卵巢毒性可以降低到一个可供食用的水平[4]。这可能是米糠中的某些微生物作用的结果。而在白酒酿造过程中,酒曲是用高粱、玉米、大米、大麦、糯米、米粉或麸皮等粮食作物作为原料,加入一定量的母曲,在控制温度和湿度的条件下制成的,其中的微生物主要有霉菌、酵母还有少量的细菌。本研究拟在已建立的离子色谱法定量检测酒曲发酵液中的河豚毒素[5]的基础上,以酒曲为基质,利用酒曲发酵液中微生物种群这一生态体系达到转化降解河豚毒素的目的。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 菌株及培养基 黑曲霉(Aspergillus niger BYK0001008)、青霉(Penicillium BYK0001005)、黑根霉(Rhizopus nigricans BYK0001003)、酿酒酵母(S.cerevisiae BYK00049-01-01)、乳酸菌(Lactobacillus BYK00056-01-01)取自农业部渔业动植物病原库。PDA 培养基和 MRS 培养基,用0.1 MPa 压力灭菌 20 min。

    1.1.2 仪器、试剂及材料 GSP-9270MBE 隔水式恒温培养箱为上海博讯实业有限公司医疗设备厂产品;GHP-9050 隔水式恒温培养箱为上海一恒科技有限公司产品;DL-5-B 型低速离心机为上海安亭科学仪器厂产品。实验用水为 Millipore Advantage A10 超纯水;浓硫酸、磷酸为分析纯,购自国药集团;TTX 标准品(纯度 ≥ 99%)购自河北省水产研究所;酒曲为山东黄河龙酒业集团股份有限公司提供。

    1.1.3 实验动物 普通级昆明小鼠 ......

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