高钺，刘舒云，黄靖香，郭维民，陈继凤，张莉，赵斌，彭江，汪爱媛，王玉，许文静，卢世璧，郭全义

    人脱细胞软骨细胞外基质对异种软骨种子细胞的影响

    高钺，刘舒云，黄靖香，郭维民，陈继凤，张莉，赵斌，彭江，汪爱媛，王玉，许文静，卢世璧，郭全义

    100853 北京，中国人民解放军总医院骨科研究所

    观察人脱细胞软骨细胞外基质(hACAM)对异种兔软骨种子细胞增殖和表型的影响。

    将差速梯度离心法制作的人脱细胞软骨细胞外基质，配制成 0.5% 的浆料，分别铺于 6 孔细胞培养板和 96 孔细胞培养板，形成 1 mm 厚的薄膜，以此培养板为实验组。空白对照组培养板仅使用单纯培养液培养。在培养板上培养兔关节软骨细胞。通过 hochest33258 染色验证人软骨细胞外基质脱细胞完全与否；分别在第 5、15 天两个时间点，通过倒置显微镜、甲苯胺蓝染色观察两种培养方法的兔软骨细胞的生长形态、细胞表型和增殖情况，用 CCK-8 细胞增殖实验比较两种培养方法在第1、3、7、10 天的增殖情况。

    通过 hochest33258 染色发现差速梯度离心的人软骨细胞外基质脱细胞完全。通过倒置显微镜观察第 5 和15 天的实验组细胞增殖情况优于空白对照组，甲苯胺蓝染色的结果也证明这个观点；CCK-8 细胞增殖试验显示第 7 天 hACAM 组在细胞增殖方面明显地优于单纯培养液的对照组(= 0.0298)，hACAM 组的软骨细胞与空白组的软骨细胞在第 10 天的增殖情况相比没有统计学差异。

    hACAM 免疫原性低，无细胞毒性，能够很好地促进异种软骨细胞的增殖。

    细胞外基质； 软骨； 软骨细胞； 组织工程； 细胞增殖

    关节软骨损伤是临床上常见的疾病，由于关节软骨自我修复能力有限，目前的一些传统方法尚无法获得满意的治疗效果[1-2]。通过构建组织工程软骨或骨软骨复合体来修复软骨缺损被认为是目前较有前景的治疗手段。在组织工程研究领域，种子细胞、可降解的支架材料以及信号因子并称为组织工程的三大基本要素，其中种子细胞在软骨组织工程方法修复过程中起着至关重要的作用。软骨细胞是软骨组织工程最常用的种子细胞，但软骨细胞增殖数量有限、体外培养易出现去分化等缺陷，是目前软骨组织工程大量应用的瓶颈[1]。目前软骨组织最常用的细胞外支架材料为人工合成材料：如聚羟基乙酸(polyglycolic acid，PGA)、聚乳酸(polylactic acid、PLA)等。但由于人工合成材料本身为异物，有可能导致过敏、感染等问题[2] ......