姚亚男，黄宇虹，王娟，陈伊，任亮亮，赖小敏

    结核特异性CD4+α/β TCR四聚体细胞株筛选技术的建立和应用

    姚亚男，黄宇虹，王娟，陈伊，任亮亮，赖小敏

    510080 广州，中山大学中山医学院微生物学教研室/热带病防治研究教育部重点实验室/海洋微生物功能分子广东省高校重点实验室/广东省重大传染病预防和控制技术中心

    应用不同的 MTB 多肽以及不同的 HLA-DR 基因构建的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR 复合物的 S2 恒定细胞株，即人工 APC 筛选、鉴定结核特异性 CD4+α/β TCR 四聚体。

    以 PE 标记的 CD4+α/β TCR 四聚体、FITC 标记的抗 HLA-DR 抗体(L243)，分别与未诱导表达或 CuSO4诱导表达后的膜表面表达结核抗原肽/HLA-DR 的果蝇 S2 恒定细胞株，以及与无多肽或结合有结核多肽的、表达 HLA-DR 的 S2 细胞株共孵育，流式细胞技术检测分析 TCR 四聚体与各种细胞株结合率的差异。

    TCR 四聚体 6M、6N 均与 2# 细胞株，即 C5/HLA-DRB1*0404(1.73%、5.93%)等具有较高的阳性结合率；结核抗原肽孵育后，一些人工 APC 的四聚体阳性结合率有所提高；所筛选的 9 个 TCR 四聚体均与 2# 细胞株有较高的结合率。

    膜表达结核抗原肽/HLA-DR 的 S2 细胞株，可以应用于结核特异性 CD4+α/β TCR 四聚体的筛选、鉴定；构建的 9 个 CD4+α/β TCR 四聚体均为结核特异性。

    结核多肽； HLA-DR； 人工抗原递呈细胞； CD4+T 细胞； TCR四聚体

    结核病是由结核分枝杆菌(m，MTB)感染引起的以呼吸系统感染为主的慢性传染病，可累及全身多器官系统，最常见的患病部位是肺脏，也可以累及肝、肾、脑、淋巴结等器官。近年来，随着耐药结核、HIV-TB 双重感染等患者的增加，发病率曾一度呈下降趋势的结核病再次成为威胁人类健康的主要疾病之一。

    机体感染 MTB 后，抗原递呈细胞(antigen presenting cell，APC)吞噬 MTB，经 APC 处理的结核抗原通过抗原肽/HLA-II 复合物与 T 细胞受体(T cell receptor，TCR)之间的相互作用被递呈给 CD4+T 细胞，所以可以通过 TCR 四聚体染色技术来检测 APC 表面的结核抗原肽/HLA-II 复合物。四聚体技术具有直接、灵敏、迅速的特点，然而首先需筛选、鉴定出高特异性和高亲和力的结核特异性 TCR 四聚体[1-2] ......