刘虹麟，许世清，彭亮，王在，房青，娄晋宁，秦蕾，王培刚，张文健

    同一组织来源的肝癌干细胞分化能力异质性的体外研究

    刘虹麟，许世清，彭亮，王在，房青，娄晋宁，秦蕾，王培刚，张文健

    100029 北京，中日友好医院临床医学研究所(刘虹麟、许世清、彭亮、王在、房青、娄晋宁、张文健)，普外科(秦蕾)；100101 北京，中国科学院生物物理所蛋白质与多肽重点实验室(王培刚)

    通过比较肝癌干细胞的不同单细胞克隆的体外分化能力，分析同一组织来源的肿瘤干细胞分化能力是否具有异质性，以进一步明确肿瘤干细胞的分化特性，为靶向肿瘤干细胞的治疗提供实验依据。

    通过有限稀释法对肝癌干细胞进行单细胞克隆培养，获得的单细胞克隆通过 MTT 测定比较其增殖能力。然后分别挑选增殖速度较快和较慢的 3 个克隆，采用 RT-PCR 方法比较其干细胞标志物表达水平。对干细胞标志表达水平高的 3 个克隆(A2、A3 和 B2)进行向成骨、软骨和脂肪方向的诱导分化。采用实时荧光定量 PCR 方法检测诱导前后成骨、软骨和脂肪标志分子的表达。

    获得的 20 个单细胞克隆增殖能力不同，并且增殖能力快的克隆表达干细胞标志物 CD133、Oct4、c-kit、SCF、nestin 比增殖能力慢的克隆强。向成骨方向诱导后，A2、A3 和 B2 克隆I型胶原 mRNA 表达水平分别升高了(4.71 ± 0.11)、(2.13 ± 0.15)和(3.82 ± 0.3)倍；骨钙素 mRNA 的表达水平分别升高(8.55 ± 0.18)、(7.02 ± 0.03)和(7.91 ± 0.09)倍，说明 A2 克隆向成骨细胞分化能力最强。向软骨方向诱导后，B2 分化能力最强，软骨标志分子蛋白聚糖和II型胶原的表达分别上调(25.01 ± 0.19)倍和(17.49 ± 0.19)倍，而在 A2 未发生明显变化，A3 只轻微上调。向脂肪方向诱导后，A2、A3 和 B2 克隆脂联素 mRNA 表达水平分别升高了(6.12 ± 0.15)、(11.45 ± 0.36)和(12.41 ± 1.03)倍，过氧化物酶体增殖物激活受体 γ mRNA 的表达水平分别升高(4.92 ± 0.02)、(9.54 ± 0.18)和(8.96 ± 0.11)倍。

    来源于同一组织的肝癌干细胞在分化能力上具有异质性，这可能是导致肿瘤组织异质性的原因之一，也提示靶向肿瘤干细胞的治疗需要联合用药。

    肿瘤干细胞； 单细胞克隆； 细胞分化； 异质性； 间质细胞

    对放化疗不敏感是恶性肿瘤临床治疗的重要难题 ......