蔡建英，吴诚义

    乳腺癌中乙醛脱氢酶1与上皮性钙黏蛋白、神经性钙黏蛋白关系的研究

    蔡建英，吴诚义

    400016 重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科

    乳腺癌干细胞是一类具有自我更新及多向分化潜能的原始细胞，在一定条件下可以分化成多种不同功能的细胞，从而影响乳腺癌的发生、发展、转移、耐药及复发等生物学行为[1]。上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)在乳腺癌浸润转移过程中起着重要作用。本实验应用免疫组织化学方法研究乳腺癌干细胞标志物乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白与 EMT 标志蛋白上皮性钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏蛋白(N-cadherin)在正常乳腺组织、乳腺癌、转移性淋巴组织中的表达情况，探讨乳腺癌干细胞与乳腺癌浸润转移的关系。

    1 材料与方法

    1.1 样本

    采集重庆医科大学附属第一医院 2010 年 9 月– 2011 年 12 月间行乳腺癌根治手术患者组织标本 40 例，同时收取肿大腋窝淋巴结 28 例，年龄 33 ~ 73 岁，平均 51.2 岁。收取本院 2011 年 9 – 11 月间行良性乳腺病变微创手术切缘组织 30 例作为正常乳腺组织标本。

    1.2 主要试剂与仪器

    ALDH1 兔抗人多克隆抗体购于美国Abcam 公司；兔抗人多克隆 E-cadherin 抗体及兔抗人多克隆 N-cadherin 抗体购于武汉博士德公司；SP 免疫组化染色试剂盒、DAB 显色试剂盒购于北京中杉金桥公司。2135 型轮转式组织切片机为德国Leica 公司产品；BX50 光学显微镜和 TVL 显微摄像系统均为日本 Olympus 公司产品。

    1.3 方法

    1.3.1 病理学检查 所有标本经 4% 甲醛溶液固定至少 24 h，石蜡包埋，4 μm 厚切片。根据病理学检测结果，将标本分为正常组(n = 28)，乳腺癌组(n = 40)，淋巴转移组(腋窝淋巴结癌转移，n = 26)。

    1.3.2 免疫组化染色 采用免疫组化 SP 法染色。标本切片行脱蜡、梯度酒精水化、热抗原修复、血清封闭后，滴加一抗工作液(ALDH1 抗体工作液浓度为 1:100；E-cadherin 与 N-cadherin 抗体工作液浓度均为 1:50)，4 ℃冰箱过夜，滴加辣根过氧化物酶标记二抗，DAB 显色，苏木精轻度复染，中性树脂封片。

    1.3.3 结果判定 ALDH1 蛋白主要表达于细胞质 ......