高瑞娟，尚伯杨，盛唯瑾，赵春燕，李电东，甄永苏

    抗明胶酶单链抗体与力达霉素融合蛋白抗肿瘤作用机制及疗效研究

    高瑞娟，尚伯杨，盛唯瑾，赵春燕，李电东，甄永苏

    100050 北京，中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所肿瘤室

    探讨抗明胶酶单链抗体 Fv 与力达霉素(LDM)融合蛋白的抗肿瘤作用机制及疗效。

    采用三联径向加压 C4柱制备 LDM 发色团 AE，体外分子重建将其装入融合蛋白Fv-LDP 中，Superdex 75 层析获得 Fv-LDP-AE。反相 HPLC 测定纯度或相对含量。流式细胞术测定 DNA 含量；采用 SA-β-gal 染色、Western blot 和细胞伤口愈合实验分别检测药物对细胞衰老、蛋白表达和迁移的影响；通过动物模型评价药物疗效。

    Fv-LDP-AE 承袭了 LDM 诱导肿瘤细胞周期阻滞、凋亡和裂亡的作用特点，并显示出更强的诱导衰老和抗迁移作用。Fv-LDP-AE 诱导凋亡和抑制迁移依次与 caspases 通路激活和 MMP-2 降调节有关。Fv-LDP-AE 可抑制小鼠和裸鼠移植瘤生长，抑制率分别可达到 86.6% 和 82.5%。

    Fv-LDP-AE 对小鼠和裸鼠移植瘤有效，可能与其对细胞周期阻滞、凋亡、裂亡和衰老的诱导以及迁移的抑制有关。

    明胶酶类； 单链抗体； 肿瘤微环境； 力达霉素

    明胶酶(gelatinases，Gel)是在肿瘤侵袭和转移过程中扮演重要角色的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases，MMPs)家族重要成员，包括 MMP-2(Gel-A)和 MMP-9(Gel-B)两种组分[1]。明胶酶在大多数肿瘤细胞高表达，其亦可分泌到肿瘤细胞外，诱导肿瘤微环境细胞发生上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)，使它们产生更多的明胶酶[2-3]。可是，明胶酶在正常细胞中却表达极低甚或检测不到，因而是临床上判断肿瘤恶性程度、转移和预后的重要指标[4-5]。在功能上，明胶酶能够降解基底膜和细胞外基质中的IV型胶原等多种成分，促进肿瘤生长、侵袭和转移[6]。抑制明胶酶活性可抑制肿瘤生长、侵袭和转移[7]。因此，明胶酶已成为抗癌药物研究的重要分子靶点[8]。

    力达霉素(lidamycin，LDM)，又名 C-1027，是一种九元环烯二炔抗肿瘤抗生素。LDM具有高效抗肿瘤活性，其体外细胞毒性比丝裂霉素和阿霉素强 10000 倍；在体内，LDM 对小鼠和裸鼠移植瘤亦具有显著疗效[9-11] ......