孙一帆，杨全利，黄建芳，赵凤芝，向军俭

    抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立

    孙一帆，杨全利，黄建芳，赵凤芝，向军俭

    510632 广州，广东省分子免疫与抗体工程重点实验室/暨南大学抗体工程研究中心

    制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、高亲和力的抗人甲胎蛋白(hAFP)单克隆抗体，初步建立双抗体夹心 ELISA 检测方法。

    通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗 hAFP 单抗的杂交瘤细胞株；对筛选所得单抗的特性进行鉴定分析；双抗体夹心 ELISA 法筛选最佳配对抗体；初步建立 DAS-ELISA 检测方法并检测血样，绘制其标准检测曲线并与进口试剂盒比较。

    共获得 12 株稳定分泌抗 hAFP 单抗的杂交瘤细胞株，其中 Ab 1 ~ Ab 5 5 株单抗的腹水效价均高于 600 万，Ab 5 的效价高达 3000 万；特异性鉴定结果表明 Ab 1 ~ Ab 5 均能够特异识别天然 hAFP 分子，但 Ab 5 与人血清白蛋白(HSA)存在较强交叉反应；抗体配对实验共筛选出 5 对(Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4 和 Ab 4/HRP-Ab 1)能够满足 hAFP 检测要求且无交叉反应的配对抗体，最终确定 Ab 1 + Ab 3/ HRP-Ab 2 和 Ab 1 + Ab 3/HRP-Ab 4 为最佳配对组合；利用最佳配对抗体组合建立标准检测曲线，其线性检测范围为 5 ~ 250 ng/ml，最低检测限 2 ng/ml，检测上限 400 ng/ml，优于进口试剂盒的线性范围 5 ~ 200 ng/ml 和最低检测限 5 ng/ml；样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率 99.2%(119/120 例)，阴性血清准确率 100%(40/40 例)。

    筛选获得的 4 株高亲和力、高特异性抗 hAFP 单抗均可应用于 DAS-ELISA 试剂盒的研制，Ab 1和 Ab 3 适合作为捕获抗体，Ab 2 和 Ab 4 适合作检测抗体；自制试剂盒的线性检测范围和最低检测限均优于进口试剂盒，表明具有商用价值。

    甲胎蛋白类； 抗体，单克隆； 双抗体夹心ELISA

    人甲胎蛋白(human alpha fetoprotein，hAFP)是一种由胎儿肝细胞和卵黄囊合成出的胚胎性糖蛋白，其功能与人血清白蛋白(human serum albumin，HSA)相似，可视其为胎儿发育时期的 HSA替代物[1-2] ......