郭维民，刘舒云，高钺，黄靖香，彭江，汪爱媛，王玉，卢世璧，郭全义

    ·论著·

    新型脱细胞半月板细胞外基质的制备及其生物相容性的研究

    郭维民，刘舒云，高钺，黄靖香，彭江，汪爱媛，王玉，卢世璧，郭全义

    目的探索新型脱细胞半月板细胞外基质(dMECM)的制备方法，并对其细胞相容性进行研究。

    细胞外基质；关节半月板；组织工程；生物相容性材料；脱细胞

    半月板是一对位于膝关节的新月形纤维软骨组织，具有负重传递、吸收震荡、稳定关节等重要功能[1]。由于其内侧区域缺少血管及神经组织，一旦发生损伤后往往难以自愈[2]。半月板组织工程的发展为半月板损伤的治疗提供了新的希望。一般来说，组织工程技术主要由种子细胞、组织工程支架、生物学和生物力学刺激三部分组成[3-4]。其中组织工程支架是非常重要的组成部分，所以选择合适的半月板生物支架材料至关重要。采用脱细胞的方法去除细胞抗原和细胞核物质但保留组织的天然细胞外基质(extracellular matrix，ECM)成分和生物活性物质，可以提供细胞生长的天然微环境，并有利于种子细胞的黏附、增殖及分化。脱细胞技术已经广泛用于不同的组织工程领域，包括血管、心脏瓣膜、软骨和神经组织工程[5-7]。然而，半月板组织工程领域却缺乏相关的研究。因此，本实验目的是通过湿法粉碎、差速离心的方法制备新型的脱细胞半月板细胞外基质(decellularized meniscal extracellular matrix，dMECM)生物材料，并对其理化性能及生物相容性进行检测。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 材料及动物新鲜猪关节购自北京市屠宰场，共购取10个月猪龄的20个膝关节。2.5月龄的健康新西兰白兔8只，雌雄不限，体重2.5 kg，由解放军总医院实验动物中心提供。所有的动物实验方案均经解放军总医院伦理委员会批准。

    1.1.2 试剂DMEM培养基、0.2%的II型胶原酶、0.25%胰蛋白酶为美国Sigma公司产品；胎牛血清(FBS)购自美国Gibco公司；青霉素-链霉素-两性霉素(三抗)购自碧云天生物技术公司；速新眠II号(戊巴比妥钠注射液)购自北京军事医学科学院；氯胺酮注射液购自华北制药集团有限责任公司；天狼猩红、甲苯胺蓝染料购自北京化学试剂公司。

    1.1.3 仪器低温高速离心机为美国Beckman公司产品；喷金镀膜机为美国Denton Vacuum Desk-Ⅱ公司产品；BB5060型CO2培养箱为德国Heraeus公司产品；冰冻切片机为日本Leica公司产品；BH-2型倒置显微镜镜、IX 70型荧光显微镜、多功能显微镜均为日本Olympus公司产品；JSM-6700F型扫描电镜为日本JEOL公司产品；细胞培养板、培养瓶、离心管、载玻片为美国Corning costar公司产品 ......