樊斐，张国军，康熙雄，翟燕红

    ·技术与方法·

    微流控芯片免疫分析抗体固定方法比较

    樊斐，张国军，康熙雄，翟燕红

    化学分析设备微型化领域或微流控分析系统，也称为“微全分析系统(μTAS)或芯片实验室(LOC)”，目前已受到广泛关注[1-2]。20世纪中期，在微流控芯片上建立的一种新型分析平台[3]，目前已被广泛应用在生物研究的各个领域[3]，例如细胞培养[4-5]、单细胞检测[6]、基因分析[7-8]和免疫分析[9-10]。近年来，微流控技术得到广泛应用，尤其是在免疫分析方面，比如对于蛋白质的检测等。但是，在研究中我们发现抗体在微流芯片基底表面的固定是影响微芯片免疫分析的关键因素之一，不仅要求目标蛋白能高效固定，同时要求固定后的目标蛋白能够较好地保持原有的生物活性，能够高效地捕捉靶蛋白。整个实验中，抗体在微芯片载体表面的固定是后续实验完成的基础，决定着实验结果的好坏。因此，本文通过对两种不同的抗体固定方法进行比较研究，分析利弊，以为相关研究者提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体、AFP标准品和辣根过氧化物酶(HRP)标记的AFP抗体购自北京科跃中楷生物技术有限公司；HRP化学发光底物液为美国Millipore公司产品；聚二甲基硅氧烷(PDMS)基本组分和固化剂为美国Dow Corning公司产品；磷酸盐缓冲液(PBS)购于北京欣经科生物技术有限公司；牛血清蛋白(BSA)购于德国Merck公司；DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱为上海一恒科学仪器有限公司产品；微流控成像仪为国家科学纳米中心产品；晶芯SmartArrayer-48点样仪为生物芯片北京国家工程研究中心产品。

    1.2 方法

    1.2.1 微流控芯片的制备本研究中所用的微流芯片为7个通道。先通过机械加工法制作微流通道的模具，然后用模塑法翻模制备微流通道，具体步骤如下：先将PDMS基本组分和固化剂以10∶1的比例混合，真空抽气使浮在表面上的气泡破裂。将抽气后的混合物浇铸在模具上放到80℃烘箱中25 min ......