陈云雨，缪冬冬，张叶明，刘晓平，张晶

    靶向PLK1 PBD小分子抑制剂荧光偏振高通量筛选模型的建立

    陈云雨，缪冬冬，张叶明，刘晓平，张晶

    241002 芜湖，皖南医学院药学院(陈云雨、缪冬冬、张叶明、刘晓平)；130022 长春，中国科学院长春应用化学研究所化学生物学实验室(陈云雨)；100050 北京，中国医学科学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室(陈云雨、张晶)

    建立适用于靶向 PLK1 PBD 小分子抑制剂规模化筛选的荧光偏振高通量筛选模型。以 pET-28a-PLK1 PBD 质粒转化Rosetta BL21(DE3)，诱导表达并纯化 PLK1 PBD蛋白。利用荧光偏振原理，以 FITC-Poloboxtide 作为分子探针，优选分子探针和 PLK1 PBD 最佳工作浓度，建立适用于 PLK1 PBD 小分子抑制剂筛选的荧光偏振高通量筛选模型。同时采用上述建立的荧光偏振筛选模型检测 poloxin 的抑制活性。成功诱导表达并纯化 PLK1 PBD 蛋白。选用 30 nmol/L分子探针和 200 nmol/L PLK1 PBD 蛋白建立荧光偏振高通量筛选模型，其 Z' 因子可达 0.74。基于该方法，检测 poloxin 的抑制活性，其 IC50值为(4.27 ± 0.69)μmol/L。成功建立了适用于靶向 PLK1 PBD 小分子抑制剂筛选的荧光偏振高通量筛选模型。

    荧光偏振免疫测定； 高通量筛选分析； PLK1 PBD 抑制剂

    保罗样激酶-1(polo-like kinase 1，PLK1)是广泛存在于真核生物中的一类丝/苏氨酸蛋白激酶。PLK1 主要在细胞有丝分裂的 G2晚期和 M 期表达，在有丝分裂启动、中心体成熟、纺锤体组装、染色体整列等细胞有丝分裂过程中发挥重要作用[1]。PLK1 在大部分恶性肿瘤细胞中呈过度表达并且与肿瘤的发生与发展密切相关，被认为是肿瘤分子靶向治疗中最具潜力的重要靶标之一[2]。

    与 PLK1 功能相反，PLK2 和 PLK3 被认为是重要的抑癌因子，在检查点导致的周期阻滞中发挥作用以保证基因组稳定性，防止癌变[3-5]。因此，小分子抑制剂对 PLK1 的高度选择性是靶向 PLK1 治疗肿瘤的关键。

    PLK1 ~ 3 的结构具有较大的相似性，N 端具有一个高度同源的激酶结构域(kinase domain，KD)，C 端具有调节 PLK1 催化活性及亚细胞动态定位的特征性结构域(polo-box domain，PBD) ......