刘宏峰，张彩虹，张秀芳，赵培庆

    PDCD5通过Wnt/β-catenin通路抑制肾细胞癌侵袭转移及其机制研究

    刘宏峰，张彩虹，张秀芳，赵培庆

    255036 山东省淄博市中心医院检验科

    探讨肾细胞癌(RCC)患者 PDCD5 的表达水平及其参与调控 RCC 侵袭与转移的可能机制。

    利用免疫组化检测 RCC 标本与癌旁组织中 PDCD5 的蛋白表达水平，同时分析 PDCD5 与疾病分期、预后的相关性；利用 transwell 及划痕实验检测 PDCD5 对肾癌细胞系 A498 侵袭与转移的影响；利用 Western blot 检测 A498 细胞转染 PDCD5 后 MMP2、MMP9、E-cadherin、N-cadherin 及 Wnt/β-catenin 通路的变化。

    ①与癌旁组织相比，RCC 标本中 PDCD5 明显下调(1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 实验试剂和仪器 Transwell 试剂盒购自Corning 公司；WB 抗体 PDCD5、MMP2、MMP9、Wnt1 及 β-catenin 购自美国 Abcam 公司；E-cadherin、N-cadherin 购自 CST 公司；MEM-EBSS 培养基购自澳大利亚 Gibco 公司；多功能酶标仪为美国 Thermofisher 公司产品；PDCD5 慢病毒载体由上海吉凯基因构建；人肾癌细胞系 A498 购自中国科学院上海细胞生物研究所。

    1.1.2 病例来源 皆来自淄博市中心医院泌尿外科且经病理确证为肾细胞癌患者，其中 I、II 期患者 35 例，III、IV 期 20 例。分析不同分期患者样本中 PDCD5 的表达水平，并根据其表达水平分析生存期并绘制 Kaplan-Meier 曲线。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 A498 于含10% 胎牛血清的 MEM-EBSS 培养基中，置于 37 ℃、5% CO2温箱中培养。

    1.2.2 免疫组化检测 PDCD5 水平 60 ℃烤片 30 min，常规脱蜡水化；抗原修复以 1 mmol/L Tris-EDTA(pH 8.0)微波修复抗原，冷却至室温，三羟甲基氨基甲烷(Tris)盐缓冲液冲洗，PBS 洗3 次，每次洗 5 min；然后用 3%H2O2-甲醇封闭内源性过氧化物酶，室温 10 min，PBS 洗 3 次，每次洗 5 min；滴加一抗：PDCD5(1:200)，4 ℃冰箱过夜；用 0.1% Tween-20 PBS 洗 3 次 ......