重组纤溶酶抑制剂Textilinin-1蛋白含量测定方法的对比研究
供试,氨基酸,蛋白质,1材料与方法,2方法,2结果,1BCA法的标准曲线,23种检测方法对蛋白含量测定结果比较,3讨论
兰海英,康乐,陈宏超,李娜,徐梅重组纤溶酶抑制剂Textilinin-1蛋白含量测定方法的对比研究
兰海英,康乐,陈宏超,李娜,徐梅
110171 沈阳,辽宁远大诺康生物制药有限公司
Textilinin-1 是从拟眼镜蛇中提取的 Kunitz 型蛋白酶抑制剂,具有纤溶酶抑制活性,可抑制基于纤溶酶被激活导致纤维蛋白溶解所导致的出血,因此具有开发为止血药的潜力,可以作为外科手术中抑肽酶的替代药物[1]。目前已有含 Textilinin-1 基因的重组毕赤酵母菌种,能高效表达目的蛋白[2]。
蛋白质含量测定是重组蛋白类药物质量控制中的重要指标之一,准确的蛋白质含量测定对产品的分装、比活性计算、残留杂质的限量控制以及其他理化特性测定均具有重要意义[3]。在研究过程中,我们发现不同方法测定的 Textilinin-1 蛋白含量结果差异很大,表明结果的准确与使用的方法有相关性。为了提高产品质量指标的准确性以及未来生产中的工作效率,我们比较分析了凯氏定氮法、BCA 法和紫外吸收法在 Textilinin-1 蛋白含量测定中的精确性和准确性,结果表明紫外吸收法是更适合于测定 Textilinin-1 蛋白含量的质量控制方法。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试品 中试生产的 3 个批次的 Textilinin-1 蛋白原液 20160804、20160810 和 20160819;对照品牛血清白蛋白(BSA)购自美国 Sigma 公司,批号 WXBC3531V。
1.1.2 主要试剂及仪器 BCA 蛋白质定量检测试剂盒购自生工生物工程(上海)公司;盐酸标准滴定液购自沈阳化学试剂厂;催化剂片购自丹麦福斯公司;浓硫酸、盐酸、三羟甲基氨基甲烷(Tris)等试剂均为国产分析纯;KjeltecTM8400 凯氏定氮仪和 TecatorTMDigestor 消化炉购自丹麦福斯公司;Biotek Epoch2 多功能酶标仪购自美国伯腾仪器有限公司;UV5Bio 紫外分光光度计购自美国梅特勒公司。
1.2 方法
1.2.1 样品 50 mmol/L 的 Tris-HCl(pH 7.5)为空白对照;供试品为 3 批次 Textilinin-1 蛋白原液;BSA 用空白对照液溶解配成 40 mg/ml 的溶液作为对照品。
1.2.2 凯氏定氮法 按照 KjeltecTM8400 自动定氮仪使用操作规程对样品定氮。上述样品分别准确量取 2 ml 加入消化管 ......
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