兰海英，康乐，陈宏超，李娜，徐梅

    重组纤溶酶抑制剂Textilinin-1蛋白含量测定方法的对比研究

    兰海英，康乐，陈宏超，李娜，徐梅

    110171 沈阳，辽宁远大诺康生物制药有限公司

    Textilinin-1 是从拟眼镜蛇中提取的 Kunitz 型蛋白酶抑制剂，具有纤溶酶抑制活性，可抑制基于纤溶酶被激活导致纤维蛋白溶解所导致的出血，因此具有开发为止血药的潜力，可以作为外科手术中抑肽酶的替代药物[1]。目前已有含 Textilinin-1 基因的重组毕赤酵母菌种，能高效表达目的蛋白[2]。

    蛋白质含量测定是重组蛋白类药物质量控制中的重要指标之一，准确的蛋白质含量测定对产品的分装、比活性计算、残留杂质的限量控制以及其他理化特性测定均具有重要意义[3]。在研究过程中，我们发现不同方法测定的 Textilinin-1 蛋白含量结果差异很大，表明结果的准确与使用的方法有相关性。为了提高产品质量指标的准确性以及未来生产中的工作效率，我们比较分析了凯氏定氮法、BCA 法和紫外吸收法在 Textilinin-1 蛋白含量测定中的精确性和准确性，结果表明紫外吸收法是更适合于测定 Textilinin-1 蛋白含量的质量控制方法。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 供试品 中试生产的 3 个批次的 Textilinin-1 蛋白原液 20160804、20160810 和 20160819；对照品牛血清白蛋白(BSA)购自美国 Sigma 公司，批号 WXBC3531V。

    1.1.2 主要试剂及仪器 BCA 蛋白质定量检测试剂盒购自生工生物工程(上海)公司；盐酸标准滴定液购自沈阳化学试剂厂；催化剂片购自丹麦福斯公司；浓硫酸、盐酸、三羟甲基氨基甲烷(Tris)等试剂均为国产分析纯；KjeltecTM8400 凯氏定氮仪和 TecatorTMDigestor 消化炉购自丹麦福斯公司；Biotek Epoch2 多功能酶标仪购自美国伯腾仪器有限公司；UV5Bio 紫外分光光度计购自美国梅特勒公司。

    1.2 方法

    1.2.1 样品 50 mmol/L 的 Tris-HCl(pH 7.5)为空白对照；供试品为 3 批次 Textilinin-1 蛋白原液；BSA 用空白对照液溶解配成 40 mg/ml 的溶液作为对照品。

    1.2.2 凯氏定氮法 按照 KjeltecTM8400 自动定氮仪使用操作规程对样品定氮。上述样品分别准确量取 2 ml 加入消化管 ......